| 双重实时PCR快速同时检测霍乱弧菌和副溶血弧菌 |
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| 引用本文： | 扈庆华,郑薇薇,石晓路,李庆阁,王冰,庄志雄,刘小立,贺连华,吴平芳. 双重实时PCR快速同时检测霍乱弧菌和副溶血弧菌[J]. 中华微生物学和免疫学杂志, 2004, 24(12): 1004-1007 |
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| 作者姓名： | 扈庆华 郑薇薇 石晓路 李庆阁 王冰 庄志雄 刘小立 贺连华 吴平芳 |
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| 作者单位： | 1. 518020,深圳市疾病预防控制中心
2. 厦门大学生命科学学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(30300281)，广东省卫生厅资助项目(A2003709)，深圳市科技局资助项目(200404139) |
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| 摘 要： | 目的建立改良分子信标双重实时PCR同时检测霍乱弧菌和副溶血弧菌的快速方法,应用于霍乱监测、副溶血弧菌食物中毒的快速诊断和海产品检验。方法根据GenBank公布的霍乱弧菌肠毒素基因A亚单位(ctxA)和副溶血弧菌的耐热直接溶血毒素基因(TDH)的保守序列,分别设计引物和改良分子信标探针,以10种细菌作对照,建立双重实时PCR改良分子信标检测体系,应用于副溶血弧菌食物中毒快速诊断和霍乱监测。结果改良分子信标双重实时PCR反应体系DNA灵敏度为102.4～166.6fgμl,菌液灵敏度为32～64CFUml或3～6CFUPCR反应体系,无交叉反应。此反应体系同时检测40株副溶血弧菌和50株霍乱弧菌,均出现特异的荧光信号,两种细菌检测互不干扰。对3起细菌性食物中毒共48份样品和100份海产品进行检测,9份副溶血弧菌实时PCR阳性,其中7份副溶血弧菌细菌培养阳性,其余样品都为阴性。从样品处理到检测结果仅需1天时间。结论改良分子信标双重实时PCR检测体系快速、灵敏度高、特异性强,可用于霍乱和副溶血弧菌食物中毒的快速诊断,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。
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| 关 键 词： | 霍乱弧菌 副溶血弧菌 改良分子信标 双重实时PCR 同步检测 |
| 修稿时间： | 2004-03-01 |
Fast detection of V.cholera and V.parahaemolyticus by a modified molecular beacons and real-time PCR |
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| HU Qing-hua,ZHENG Wei-wei,SHI Xiao-lu,LI Qing-ge,WANG Bing,ZHUANG Zhi-xiong,LIU Xiao-li,HE Lian-hua,WU Ping-fang. Shenzhen Center for Disease Control and Prevention,Shenzhen ,China. Fast detection of V.cholera and V.parahaemolyticus by a modified molecular beacons and real-time PCR[J]. Chinese Journal of Microbiology and Immunology, 2004, 24(12): 1004-1007 |
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| Authors: | HU Qing-hua ZHENG Wei-wei SHI Xiao-lu LI Qing-ge WANG Bing ZHUANG Zhi-xiong LIU Xiao-li HE Lian-hua WU Ping-fang. Shenzhen Center for Disease Control Prevention Shenzhen China |
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| Affiliation: | HU Qing-hua*,ZHENG Wei-wei,SHI Xiao-lu,LI Qing-ge,WANG Bing,ZHUANG Zhi-xiong,LIU Xiao-li,HE Lian-hua,WU Ping-fang. *Shenzhen Center for Disease Control and Prevention,Shenzhen 518020,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | V.cholera V.parahaemolyticus Modified molecular beacon Dual real-time PCR Simultaneous detection |
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