| 针对增强型绿色荧光蛋白RNA干扰表达载体的构建和鉴定 |
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| 引用本文： | 马龙洋,刘家云,许彦鸣,贾林涛,王成济,杨安钢. 针对增强型绿色荧光蛋白RNA干扰表达载体的构建和鉴定[J]. 医学争鸣, 2005, 26(8): 676-678 |
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| 作者姓名： | 马龙洋 刘家云 许彦鸣 贾林涛 王成济 杨安钢 |
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| 作者单位： | 第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部免疫学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部免疫学教研室,陕西,西安,710033 |
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| 基金项目： | 国家 973基金 (2004CB518805)，国家 863基金(2004AA217 071)，国家自然科学基金(30200274) |
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| 摘 要： | 目的：构建针对增强型(EGFP)的pSUPER siRNA(small interferencing RNA)表达载体，并在哺乳动物细胞COS-7细胞中观察其干扰效果．方法：设计针对EGFP编码区的寡核苷酸链，体外退火后克隆入经Bgl Ⅱ和HindⅢ双酶切线性化的干扰载体pSUPER中，对重组质粒进行酶切分析和DNA序列测定．通过脂质体介导，将重组干扰质粒与pIRESE2-EG-FP瞬时共转染COS-7细胞，48h后荧光显微镜下观察干扰效果．结果：经酶切鉴定及DNA序列测定证实，重组质粒中已插入了目的基因片段．瞬时共转染后荧光显微镜观察结果显示：只转染pIRES2-EGFP及共转染pIRES2-EGFP和空载体pSUPER的COS-7细胞中有大量的EGFP表达．而共转染pIRES2-EGFP和pSUPER-R237、pSUPER—R304、pSUPER-R447的COS-7细胞中发出荧光的细胞数量明显减少，荧光强度也明显降低．结论：成功构建了针对EGFP的RNA干扰表达载体pSUPER—R237，pSUPER—R304和pSUPER—R447，并与pIR—ESE2一EGFP瞬时共转染COS-7细胞，有效地抑制了EGFP在哺乳动物细胞中的表达。
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| 关 键 词： | RNA干扰 增强型绿色荧光蛋白 COS-7细胞系 |
| 文章编号： | 1000-2790(2005)08-0676-03 |
| 修稿时间： | 2004-12-16 |
Construction and identification of RNA interference expression vector targeting EGFP |
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| MA Long-Yang,LIU Jia-yun,XU Yan-Ming,JIA Lin-Tao,WANG Cheng-Ji,YANG An-Gang. Construction and identification of RNA interference expression vector targeting EGFP[J]. Negative, 2005, 26(8): 676-678 |
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| Authors: | MA Long-Yang LIU Jia-yun XU Yan-Ming JIA Lin-Tao WANG Cheng-Ji YANG An-Gang |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | RNA interference enhanced green fluorescent protein COS-7 cell line |
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