基于CRISPRi的贝氏柯克斯体dotB基因沉默

目的 更简便快捷地研究贝氏柯克斯体基因功能。方法 基于CRISPRi原理构建携带化脓链球菌dCas9的重组质粒，将靶向贝氏柯克斯体dotB基因的sgRNA序列插入重组质粒中并将质粒经电转化导入贝氏柯克斯体，利用脱水四环素(aTC)诱导dCas9表达以抑制贝氏柯克斯体dotB基因的转录，从而建立基于CRISPRi系统的贝氏柯克斯体基因沉默技术。结果 在aTC诱导下，该CRISPRi系统中dCas9可正常表达，dotB在转录水平和蛋白水平均被抑制，dotB表达抑制后贝氏柯克斯体胞内生长繁殖水平降低。结论成功建立起基于CRISPRi的贝氏柯克斯体的基因沉默技术，为研究贝氏柯克斯体特定基因的生物学功能研究提供了技术支撑。