| 人乳头瘤病毒58型E6E7融合基因重组巨细胞病毒的构建及鉴定 |
| |
| 引用本文： | 杜阳阳,张放,苗智颖,赵红,马迪,王静,李淑英,郑春阳,李劲涛.人乳头瘤病毒58型E6E7融合基因重组巨细胞病毒的构建及鉴定[J].中国人兽共患病杂志,2020,36(4):303. |
| |
| 作者姓名： | 杜阳阳 张放 苗智颖 赵红 马迪 王静 李淑英 郑春阳 李劲涛 |
| |
| 作者单位： | 1.华北理工大学(河北省慢性疾病重点实验室,唐山市慢性病临床基础研究重点实验室),唐山 063210;2.北京工业大学,生命科学与生物工程学院,北京 100124 |
| |
| 基金项目： | 河北省留学人员科技活动资助项目(No. CY201620),河北省卫计委项目(No. 20170896) |
| |
| 摘 要： | 目的 利用人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)58突变型E6E7(Mutant type E6E7,mE6E7)融合基因为靶点,巨细胞病毒株(Towne株)细菌人工染色体(SW102 Towne bacterial artificial chromosome,SW102-T-BAC)为载体,构建携带HPV58 mE6E7融合基因的重组病毒,探讨HPV58mE6E7的转化活性。方法 PCR扩增带有50 bp Towne 开放读码框(open reading frame,ORF)75左右同源臂的GalK、mE6E7及野生型E6E7(Wild type E6E7,wE6E7)融合基因片段,切胶回收纯化;将GalK片段电转到(SW102-T-BAC)感受态细胞,经过同源重组、GalK及氯霉素抗性筛选,获得SW102-T-ORF75-Galk-BAC克隆;然后分别将纯化的mE6E7及wE6E7电转到SW102-T-ORF75-Galk-BAC感受态细胞,经脱GalK及氯霉素抗性筛选,获得SW102-T-ORF75-mE6E7-BAC及SW102-T-ORF75-wE6E7-BAC克隆;提取所得克隆质粒DNA,转染ARPE-19细胞(以转染SW102-T-BAC的细胞及未转染细胞为对照),逆转录PCR及测序分析验证转染细胞中mE6E7及wE6E7的表达状况;观察重组病毒T-ORF75-mE6E7及T-ORF75-wE6E7对转染ARPE-19细胞的影响,通过软琼脂克隆分析mE6E7及wE6E7转化活性。结果 获得了SW102-T-ORF75-mE6E7-BAC及SW102-T-ORF75-wE6E7-BAC的克隆。逆转录PCR及测序分析验证转染细胞中mE6E7及wE6E7的表达正确。转染SW102-T-ORF75-wE6E7-BAC的细胞生长失去接触抑制,出现重叠生长现象,其形态由原来梭形变为变圆、肿胀、胞浆颗粒增多;并且在软琼脂中能够形成克隆;而转染SW102-T-ORF75-mE6E7-BAC、SW102-T-BAC及未转染细胞未出现上述细胞的特点。结论 获得了T-ORF75-mE6E7及T-ORF75-wE6E7重组病毒,并且重组病毒T-ORF75-mE6E7的转化活性已消除,为HPV58型治疗性疫苗的研究奠定了基础。
|
| 关 键 词： | 人乳头瘤病毒 E6E7融合基因 细菌人工染色体 同源重组 巨细胞病毒 |
| 收稿时间： | 2019-09-06 |
Construction and identification of recombinant cytomegalovirus with human papillomavirus 58 E6E7 fusion gene |
| |
| DU Yang-yang,ZHANG Fang,MIAO Zhi-ying,ZHAO Hong,MA Di,WANG Jing,LI Shu-ying,ZHENG Chun-yang,LI Jin-tao.Construction and identification of recombinant cytomegalovirus with human papillomavirus 58 E6E7 fusion gene[J].Chinese Journal of Zoonoses,2020,36(4):303. |
| |
| Authors: | DU Yang-yang ZHANG Fang MIAO Zhi-ying ZHAO Hong MA Di WANG Jing LI Shu-ying ZHENG Chun-yang LI Jin-tao |
| |
| Institution: | 1. North China University of Science and Technology/Hebei Key Laboratory for Chronic Diseases, Tangshan Key Laboratory for Preclinical and Basic Research on Chronic Diseases, Tangshan 063210,China;2.College of Life Science and Bio-engineering, Beijing University of Technology, Beijing 100124,China |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | human papillomavirus E6E7 fusion gene bacterial artificial chromosome (BAC) homologous recombination cytomegalovirus |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《中国人兽共患病杂志》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《中国人兽共患病杂志》下载免费的PDF全文 |
|
