| 一种快速鉴别牛肉中大肠杆菌O157∶H7检测方法的建立及应用 |
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| 引用本文： | 赵亚男,曾德新,郭德华,蒋原,蒋鲁岩,李鑫妮,陈伟,汤芳,薛峰,戴建君.一种快速鉴别牛肉中大肠杆菌O157∶H7检测方法的建立及应用[J].中国人兽共患病杂志,2020,36(4):272-279. |
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| 作者姓名： | 赵亚男 曾德新 郭德华 蒋原 蒋鲁岩 李鑫妮 陈伟 汤芳 薛峰 戴建君 |
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| 作者单位： | 1.南京农业大学动物健康与食品安全国际合作实验室,南京 210095;2.上海海关动植物与食品检验检疫技术中心,上海 200135;3.南京海关动植物与食品检测中心,南京 210001;4.合肥工业大学食品与生物工程学院,合肥 230601 |
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| 基金项目： | “十三五”国家重点研发计划重点专项(No.2018YFC1603600);南京海关科研项目(No.2018KJ32);江苏省农业自主创新项目(No.CX(18)2011) |
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| 摘 要： | 目的 建立一种快速、准确检测牛肉中大肠杆菌O157∶H7的方法。方法 利用抗大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体2G5(捕获抗体),酶标单克隆抗体2E3(HRP-2E3,检测抗体),建立可用于检测大肠杆菌O157∶H7的双抗体夹心ELISA方法,同时对反应条件进行优化并对该方法进行评价。 结果 通过优化得到最佳反应条件,单克隆抗体2G5最佳包被浓度为4.48 μg/mL,HRP-2E3最佳检测浓度为19.9 μg/mL。该方法对纯培养菌液最低检出限为 1×105 CFU/mL,具有良好的敏感性,且特异性良好,与其他大肠杆菌、沙门氏菌、李斯特菌等均无交叉反应。板内及板间变异系数均小于7%,具有较高的精密度。人工污染牛肉样品增菌8 h后,对大肠杆菌O157∶H7的检出限为1 CFU/25 g。结论 建立的双抗体夹心ELISA检测方法灵敏度、准确度、重复性良好,特异性强,可用于临床实际样品检测。
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| 关 键 词： | 大肠杆菌O157∶H7 双抗体夹心ELISA 单克隆抗体 牛肉 |
| 收稿时间： | 2019-06-20 |
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