结缔组织生长因子、转化生长因子β1真核表达载体的构建及对硬皮病的FB凋亡的影响

目的构建结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、转化生长因子β1(transforming growthfactor-β1,TGF-β1)真核表达载体,并观察CTGF、TGF-β1基因转染硬皮病患者皮损培养的成纤维细胞凋亡的影响。方法采用阳离子脂质体LipofectamineTM2000 CTGF、TGF-β1DNA质粒转染至传代培养的硬皮病FB中,用倒置荧光显微镜观察转染后绿色荧光蛋白基因的表达,计算转染率,用流式细胞术检测CTGF、TGF-β1DNA质粒分组转染的各组成纤维细胞的凋亡情况。结果实验成功构建了CTGF、TGF-β1真核表达载体,荧光显微镜下观察到转染后的CTGF、TGF-β1基因发出的稳定的绿色荧光的信号,转染率为(85.7±2.1)%、(66.9±3.3)%,与正常组比较差异有统计学意义(P0.05)。流式细胞仪法显示正常组细胞凋亡较高(6.52%),而硬皮病和各转染组细胞凋亡率降低,尤以CTGF转染硬皮病组最低(P0.05)。结论阳离子脂质体LipofectamineTM2000可有效介导真核表达质粒转染CTGF、TGF-β1,且CTGF、TGF-β1能抑制成纤维细胞的凋亡及促进细胞增殖的作用。