| 分泌人肿瘤坏死因子α的基因工程细胞系的建立 |
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| 引用本文： | 高宇红,薛毅珑,刘建伟,崔忻,罗芸.分泌人肿瘤坏死因子α的基因工程细胞系的建立[J].现代肿瘤医学,2008,16(3):345-348. |
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| 作者姓名： | 高宇红 薛毅珑 刘建伟 崔忻 罗芸 |
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| 作者单位： | 解放军总医院老年医学研究所细胞生物学研究室,北京,100853 |
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| 摘 要： | 目的:建立稳定的基因工程细胞系.方法:将含有人肿瘤坏死因子α(hTNFα)全长cDNA插入表达载体pSNAV2.0,产生重组质粒pSNAV2.0-TNFα,利用阳离子脂质体介导将其转染到人HEK-293细胞中,G418筛选阳性克隆hTNF/293,采用Western blot检测转染细胞上清中hTNF蛋白的表达.结果:通过Sal I和EcoR I双酶切、PCR及测序鉴定证明:在质粒pSNAV2.0中插入片段正确.采用RT-PCR和Western blot法检测表明HEK-293细胞培养上清中有hTNFct蛋白表达,分子量为17KDa.结论:成功构建重组质粒pSNAV2.0-TNFα,真核表达载体构建正确,转染HEK-293细胞后可有效分泌hTNFα蛋白,并能分泌到细胞外.
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| 关 键 词： | 人肿瘤坏死因子α 真核表达载体 人胚胎肾细胞HEK-293 细胞系 人肿瘤坏死因子α 基因工程 细胞系 tumor necrosis factor human expression vector recombinant Construction cells 细胞外 α蛋白 真核表达载体构建 分子量 蛋白表达 培养上清 插入片段 测序鉴定 双酶切 结果 转染细胞 |
| 文章编号： | 1672-4992-(2008)03-0345-04 |
| 修稿时间： | 2007年8月29日 |
Construction of recombinant expression vector for human tumor necrosis factor α and its expression in HEK-293 cells |
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| GAO Yu-hong,XUE Yi-long,LIU Jian-wei,CUI Xin,LUO Yun.Construction of recombinant expression vector for human tumor necrosis factor α and its expression in HEK-293 cells[J].Journal of Modern Oncology,2008,16(3):345-348. |
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| Authors: | GAO Yu-hong XUE Yi-long LIU Jian-wei CUI Xin LUO Yun |
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