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缺氧诱导的肝癌靶向性基因治疗载体的构建和检测
引用本文:禄韶英,王燕,孙学军,白纪刚,张伟. 缺氧诱导的肝癌靶向性基因治疗载体的构建和检测[J]. 中国肿瘤生物治疗杂志, 2006, 13(1): 59-62
作者姓名:禄韶英  王燕  孙学军  白纪刚  张伟
作者单位:1. 西安交通大学医学院第一附属医院普通外科,西安,710061
2. 第四军医大学唐都医院中心实验室,西安,710038
摘    要:目的:构建缺氧诱导的AFP基因启动子(HRE-AFPp)调控的基因表达载体,并检测该调控元件的特异性和对缺氧诱导的反应性。方法:用PCR方法从人类基因组中扩增VEGF基因缺氧反应元件(HRE)和AFP基因启动子(AFPp),将上述片段与含有报告基因(强化绿色荧光蛋白基因)载体pEGFP-1的多克隆位点连接,构建成为缺氧诱导的AFP基因启动予调控的基因表达载体(pEGFP-[HRE]AFPp)。用脂质体法将表达载体转染表达或不表达AFP的细胞系,G418筛选阳性克隆,荧光显微镜观测重组AFPp的活性,并用流式细胞术检测缺氧诱导是否对其有调控作用。结果:成功地将HRE、AFPp克隆到报告基因载体pEGFP-1的多克隆位点,酶切鉴定和DNA序列分析无误,荧光显微镜观测证实EGFP能在AFP阳性肝癌细胞特异性表达,流式细胞术检测证实,16h缺氧诱导能增强EGFP的表达(P〈0.01)。结论:缺氧诱导的AFP顺式作用元件修饰的基因治疗载体,在基因转录水平特异性调控目的基因的表达,为下一步将其作为肝癌基因治疗载体奠定了基础。

关 键 词:甲胎蛋白基因  缺氧反应元件  肝细胞癌
文章编号:1007-385X(2006)01-0059-04
收稿时间:2005-11-24
修稿时间:2006-01-11

Construction and verification of a hypoxia-induced gene therapy vector targeting hepatocellular carcinoma
LU Shao-ying,WANG Yan,SUN Xue-jun,BAI Ji-gang and ZHANG Wei. Construction and verification of a hypoxia-induced gene therapy vector targeting hepatocellular carcinoma[J]. Chinses Journal of Cancer Biotherapy, 2006, 13(1): 59-62
Authors:LU Shao-ying  WANG Yan  SUN Xue-jun  BAI Ji-gang  ZHANG Wei
Abstract:
Keywords:AFP gene   hypoxia responsive element   hepatocellular carcinoma
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