| 杀菌/通透性增加蛋白N端片段在原核细胞中的表达及其临床应用的初步探讨 |
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| 引用本文： | 周宇麒,张天托,胡波,李林,黄静. 杀菌/通透性增加蛋白N端片段在原核细胞中的表达及其临床应用的初步探讨[J]. 中国免疫学杂志, 2005, 21(5): 385-389 |
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| 作者姓名： | 周宇麒 张天托 胡波 李林 黄静 |
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| 作者单位： | 1. 中山大学附属第三医院内科,广州,510630
2. 中山大学附属第三医院分子生物实验室,广州,510630 |
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| 摘 要： | 目的：构建编码杀菌，通透性增加蛋白(BPI)N端片段基因原核表达载体，并在大肠杆菌中表达重组蛋白。方法：采用RT-PCR技术，从人外周血中性粒细胞的总RNA中扩增BPI蛋白N端片段cDNA编码区基因，DNA序列分析鉴定；将测序证实的BPI蛋白N端片段编码区基因PCR产物直接克隆于原核表达载体pBAD／Thio-TOPO中，再次测序鉴定；通过在大肠杆菌中以L-阿拉伯糖进行诱导表达，然后以SDS-PAGE、Westerm blot对表达的重组蛋白进行分析。重组蛋白经初步纯化处理后，进行生物学活性检测。结果：RT-PCR扩增出一个835bp的DNA片段，DNA测序表明为所需目的基因。限制性内切酶酶切和DNA序列分析表明，BPI蛋白N端片段正确克隆到大肠杆菌表达载体pBAD／Thio-TDPO中，SDS-PAGE和Wester blot结果表明在大肠杆菌中成功表达了BPI蛋白N端片段。对该蛋白进行初步活性测定显示其可与BPI单克隆抗体结合并具有杀灭耐药铜绿假单胞菌的活性。结论：成功构建了BPI蛋白N端片段编码区基因原核表达载体，并在大肠杆菌中进行了表达，表达的重组蛋白具有一定的生物活性。
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| 关 键 词： | 杀菌作用 通透性增加蛋白 基因克隆 基因表达 中性粒细胞 |
| 文章编号： | 1000-484X(2005)05-0385-05 |
Expresson of the N-terminal fragment gene of bactericidal/permeability increasing protein by E.coli and its initial clinical usage |
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| ZHOU Yu-Qi,ZHANG Tian-tuo,HU Bo,LI Lin,HUANG Jing. Expresson of the N-terminal fragment gene of bactericidal/permeability increasing protein by E.coli and its initial clinical usage[J]. Chinese Journal of Immunology, 2005, 21(5): 385-389 |
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| Authors: | ZHOU Yu-Qi ZHANG Tian-tuo HU Bo LI Lin HUANG Jing |
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| Affiliation: | ZHOU Yu-Qi,ZHANG Tian-Tuo,HU Bo,LI Lin,HUANG Jing.Department of Medicine,the Third Affiliated Hospital of Sun Yat-Sen University,Guangzhou 510630,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Bactericidal/permeability-increasing protein Gene clone Gene expression |
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