Rb基因增强HSV-TK/GCV系统"旁观者效应"的机制研究

目的：探讨Rb和HSV－TK基因共转染增强HSV－TK／GCV系统“旁观者效应”的可能性及其机制。方法：构建含长度为1．65kb Rb基因的真核表达质粒pcDNA3.1-Rb，用DOTAP将pcDNA3.1-Rb以及携带HSV－TK基因的质粒tgCMV/HyTK分别或共同导入骨肉瘤细胞株OS732。应用RT－PCR和Northern blot检测TK和Rb基因的表达；用细胞计数、流式细胞仪分析和软琼脂克隆形成实验观察细胞的生长状况；用半定量RT－PCR法、Western Blot和罗氏黄荧光传输法检测裂隙连接蛋白基因Connexin43的表达和细胞间裂隙连接信息通讯的能力；用MTT法和混合共培养实验分别检测各种细胞对GCV的敏感性HSV－TK／GCV系统的“旁观者效应”。结果：成功地构建了真核表达质粒pcDNA3.1-Rb；得到三种转基因的细胞株OS732TK、OS732Rb、OS732RbTK；并在mRNA水平检测到OS732TK和OS732RbTK细胞内HSV－TK基因的表达，在OS732Rb和OS732RbTK细胞内存在内源性和外源性Rb基因的表达；与OS732相比，OS732Rb和OS732RbTK细胞的形态发生改变，其生长速度减慢，软琼脂形成集落能力降低，细胞周期阻滞于G0G1期；OS732Rb细胞的Tonnexin43表达和细胞间信息通讯能力增强；仅TK阳性细胞OS732TK和OS732RbTK的存活率与GCV的浓度存在剂量依赖性关系，但在与TK阴性细胞混合共培养实验中，OS732和OS732Rb细胞增显示对GCV的敏感性，在相同处理条件下，OS732Rb细胞的存活率明显低于OS732细胞。结论：Rb基因通过抑制骨肉瘤细胞的生长和提高细胞间信息通讯能力来增强HSV－TK／GCV系统的“旁观者效应”。

The study on mechanism of enhancing bystander effect of HSV-TK/GCV system by Rb gene