人IFN-β重组慢病毒的制备及对肺癌细胞增殖的影响 |
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引用本文: | 郭亮,谢晓,胡丰庆,梅举,丁芳宝,肖海波.人IFN-β重组慢病毒的制备及对肺癌细胞增殖的影响[J].临床肺科杂志,2013,18(4):683-686. |
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作者姓名: | 郭亮 谢晓 胡丰庆 梅举 丁芳宝 肖海波 |
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作者单位: | 上海交通大学医学院附属新华医院心胸外科,上海200092 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(30901476) |
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摘 要: | 人β干扰素;;慢病毒载体;;基因转染;;A549细胞
%X 目的构建人β干扰素(IFN-β)基因重组慢病毒,体外转染人肺癌A549细胞,观察IFN-β基因的表达及其对A549细胞的增殖抑制作用。方法通过聚合酶链反应(PCR)获得人IFN-β基因,克隆到慢病毒载体,通过转染293细胞包装制备慢病毒液,并体外感染A549细胞,采用RT-PCR及Western Blot检测IFN-β基因在A549细胞中的表达情况。应用MTS法检测转染后对A549细胞增殖的影响。结果 IFN-β基因重组质粒经酶切后电泳结果显示能得到与理论大小相符的片段,基因测序结果与GenBank序列完全一致,重组质粒经鉴定正确,转染293细胞获得病毒滴度为3×107PFU/ml,体外感染A549细胞后,RT-PCR、Western Blot检测IFN-β表达水平明显增高,并可明显抑制A549细胞增殖。结论本研究成功构建IFN-β基因重组慢病毒,体外感染后能够稳定表达并抑制A549细胞增殖,为应用IFN-β基因治疗肺癌奠定初步基础。
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关 键 词: | 人β干扰素 慢病毒载体 基因转染 A549细胞 |
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