尿激酶受体在大肠杆菌中的表达及其多克隆抗体的制备

目的构建尿激酶受体（ｕｒｏｋｉｎａｓｅ－ｔｙｐｅｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ，ｕＰＡＲ）表达质粒并在大肠杆菌中表达，用纯化的表达产物ｕＰＡＲ蛋白制备多克隆抗体并初步应用于肿瘤标本的检测。方法用基因工程的方法构建ｕＰＡＲｃＤＮＡ表达质粒ｐＬＹ４－ｕＰＡＲ，转化重组大肠杆菌在４２℃条件下诱导表达；利用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ进行纯化并用纯化后的抗原免疫新西兰兔制备多克隆抗体，应用制备的抗体对乳腺癌和肝癌中ｕＰＡＲ的分布进行检测。结果ｕＰＡＲ表达质粒在大肠杆菌中高效表达，表观Ｍｒ为３０×１０３左右。表达的ｕＰＡＲ占全菌蛋白的２０％左右；获得了效价为１∶３２的ｕＰＡＲ多克隆抗体；发现ｕＰＡＲ主要分布在癌细胞的表面及胞质内，而在癌旁组织中则较弱。结论ｕＰＡＲ在大肠杆菌获得高效表达，并制备得到多克隆抗体。ｕＰＡＲ在癌组织（乳腺癌及肝癌）与癌旁组织间的表达差异提示可将其应用到临床肿瘤的诊断与肿瘤转移的实验性研究中。