| 应用重组PCR技术构建人单核细胞趋化蛋白-1cDNA的突变体-hμMCP-1(7ND) |
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| 引用本文： | 仲琳,张运,张梅,季哓平,陈文强,李大庆,张岩,张冰,杨军,刘少荣. 应用重组PCR技术构建人单核细胞趋化蛋白-1cDNA的突变体-hμMCP-1(7ND)[J]. 中国病理生理杂志, 2005, 21(12): 2452-2456. DOI: 1000-4718 |
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| 作者姓名： | 仲琳 张运 张梅 季哓平 陈文强 李大庆 张岩 张冰 杨军 刘少荣 |
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| 作者单位： | 1山东大学齐鲁医院心内科，2山东大学医学院分子生物学实验室， 山东 济南 250012；
3烟台毓璜顶医院， 山东 烟台 264000 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(NO．60271015)，卫生部临床学科重点项目(NO．20012943) |
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| 摘 要： | 目的：探讨用重组PCR技术对人单核细胞趋化蛋白-1（hμMCP-1）基因cDNA进行缺失突变，构建N末端缺失7个氨基酸的编码序列hμMCP-1突变体-hμMCP-1（7ND）cDNA，以期实现7ND基因治疗抑制MCP-1活性。 方法： 根据缺失前后的两段基因片段A和B分别设计两对引物即内引物与外引物，第一轮PCR反应通过每段各自的内外引物，分别获得加有互补末端的A+和B+DNA片段。然后进行第二轮PCR反应，以第一轮PCR产物为模板，加入两外引物，获得大量重组体AB基因片段，将PCR产物与T载体连接，进行酶切鉴定并测序证实成功进行了hμMCP-1的基因改造。为便于表达hμMCP-1突变体，通过EcoRⅠ/HindⅢ酶切，将目的基因克隆入pcDNA3.1真核表达载体中。 结果： 经酶切鉴定并测序，表明已成功地构建了hμMCP-1cDNA突变体-7ND的真核细胞表达载体。 结论： 已成功进行了hμMCP-1基因 cDNA的缺失突变，获得了7ND cDNA的克隆，为进一步研究hμMCP-1功能奠定了基础。
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| 关 键 词： | 单核细胞化学吸引蛋白质1 DNA 克隆 序列 |
| 文章编号： | 1000-4718（2005）12-2452-05 |
| 收稿时间： | 2004-04-19 |
| 修稿时间： | 2004-04-192004-11-23 |
Construction of human monocyte-chemoattractant protein-1 mutant-7 ND by recombinant PCR |
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| ZHONG Lin,ZHANG Yun,ZHANG Mei,JI Xiao-ping,CHEN Wen-qiang,LI Da-qing,ZHANG Yan,ZHANG Bing,YANG Jun,LIU Shao-rong. Construction of human monocyte-chemoattractant protein-1 mutant-7 ND by recombinant PCR[J]. Chinese Journal of Pathophysiology, 2005, 21(12): 2452-2456. DOI: 1000-4718 |
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| Authors: | ZHONG Lin ZHANG Yun ZHANG Mei JI Xiao-ping CHEN Wen-qiang LI Da-qing ZHANG Yan ZHANG Bing YANG Jun LIU Shao-rong |
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| Affiliation: | 1Department of Cardiology, Qilu Hospital,2Department of Biochemistry, Medical College, Shandong University, Jinan 250012, China;3Yantai Yuhuangding Hospital, Yantai 264000, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Monocyte chemoattractant protein - 1 DNA Clone Sequence |
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