| 慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞及肝组织中HBV cccDNA定量检测 |
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| 引用本文： | 郝勇,苗千里,缪晓辉,赵克开,李东良,林江,沈雪林. 慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞及肝组织中HBV cccDNA定量检测[J]. 中华传染病杂志, 2007, 25(1): 38-42 |
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| 作者姓名： | 郝勇 苗千里 缪晓辉 赵克开 李东良 林江 沈雪林 |
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| 作者单位： | 1. 200003,上海,第二军医大学附属长征医院感染科
2. 解放军第四零四医院感染科 |
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| 摘 要： | 目的优化HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)特异性定量检测方法,并观察HBV cccDNA在慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)及肝组织中的分布情况。方法标本抽提核酸后,以不降解质粒的ATP依赖的DNA酶(PSAD)进行酶切,再以跨双缺口的特异性引物进行荧光PCR定量检测HBV cccDNA;用10份HBV高滴度(10~7拷贝/mL)血清和梯度稀释的HBV克隆质粒标准品,验证此检测方法的特异度和灵敏度;取慢性乙型肝炎患者PBMC和肝组织穿刺标本各50份,检测其总HBV DNA和cccDNA。结果10份血清标本均无假阳性cccDNA检测结果,灵敏度可达到10~3拷贝/mL。所有PBMC中cccDNA检测均阴性;所有肝组织中总HBV DNA和cccDNA检测均阳性,总HBV DNA含量为3．19×10~2～6．69×10~7拷贝/μg人基因组DNA,cccDNA含量为7．32×10~0～6．51×10~6拷贝/μg人基因组DNA,同一患者肝组织中总HBV DNA含量是cccDNA含量的10．7倍至9．2×10~5倍。结论本方法特异度和灵敏度高。PBMC不能支持HBV的复制。在慢性乙型肝炎患者的肝组织中均可检测到cccDNA,但其水平并非与细胞内总HBV DNA水平正相关。
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| 关 键 词： | 肝炎病毒,乙型 DNA,环状 单个核细胞 肝 |
Quantitative detection of hepatitis B virus cccDNA in peripheral blood mononuclear cells and livers in patients with chronic hepatitis B |
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| HAO Yong,MIAO Qian-li,MIAO Xiao-hui,ZHAO Ke-kai,LI Dong-liang,LIN Jiang,SHEN Xue-lin. Quantitative detection of hepatitis B virus cccDNA in peripheral blood mononuclear cells and livers in patients with chronic hepatitis B[J]. Chinese Journal of Infectious Diseases, 2007, 25(1): 38-42 |
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| Authors: | HAO Yong MIAO Qian-li MIAO Xiao-hui ZHAO Ke-kai LI Dong-liang LIN Jiang SHEN Xue-lin |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Hepatitis B virus DNA circular Peripheral blood mononuclear cells Liver |
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