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RNA干扰抑制Fas基因的表达对小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3的影响
引用本文:张春兵,高峰,张明顺,腾凤猛.RNA干扰抑制Fas基因的表达对小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3的影响[J].临床检验杂志,2013,31(6):438-441.
作者姓名:张春兵  高峰  张明顺  腾凤猛
作者单位:南京中医药大学附属江苏省中医院检验科,南京210029;南京中医药大学附属江苏省中医院检验科,南京210029;南京医科大学微生物学和免疫学教研室,南京210029;南京中医药大学附属江苏省中医院检验科,南京210029
基金项目:国家自然科学基金(81171659);江苏省自然科学基金(BE2010768)。
摘    要:摘要:目的:用RNA干扰(RNAi)技术抑制小鼠Fas基因表达,观察其对脑微血管内皮细胞bEnd.3增殖及FADD-FLIP-TRAF-NF-κB信号传导途径的影响, 为后续FasL低剂量兴奋效应研究提供实验基础。 方法:设计合成靶向小鼠Fas基因的小干扰RNA(siRNA)片段,用脂质体包埋转染bEnd.3细胞;CCK-8法检测细胞增殖;RT-PCR检测bEnd.3细胞FasmRNA的表达情况;western blot 检测 Fas、FADD、FLIP、TRAF蛋白表达水平。 结果:CCK-8法检测显示,Fas-siRNA组细胞增殖水平与空白对照组比较,无统计学差异(t=1.805,P>0.05);RT-PCR 结果表明,与空白组的Fas mRNA表达水平比较,Fas-228-、Fas-310-、Fas-427-、Fas-891-siRNA组mRNA表达水平降低,差异有统计学意义(F=123.127,P<0.05);western blot显示,Fas-siRNA组与空白对照组Fas蛋白表达水平比较,差异有统计学意义(t=12.101,P<0.01);Fas-siRNA组FADD、FLIP、TRAF蛋白相对表达水平与空白对照组比较,表达均下调(t=28.315、17.563、8.903,P<0.05)。 结论:Fas-siRNA能有效封闭Fas基因的表达,抑制Fas下游信号FADD、FLIP、TRAF蛋白表达。

关 键 词:Fas基因  RNA干扰  细胞增殖
收稿时间:2013/3/20 0:00:00
修稿时间:2013/5/17 0:00:00

Effect of silencing Fas expression by RNA interference on mice brain microvascular endothelial cell line bEnd.3
Abstract:
Keywords:Fas gene  RNA interference  cell proliferation
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