血管内皮生长因子C正、反义真核表达载体的构建及鉴定 |
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引用本文: | 朱鹏,张剑波,代远斌,王继见.血管内皮生长因子C正、反义真核表达载体的构建及鉴定[J].解放军医学杂志,2008,33(12):1451-1453. |
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作者姓名: | 朱鹏 张剑波 代远斌 王继见 |
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作者单位: | 重庆医科大学附属二院普外科,重庆,400010;重庆医科大学附属二院普外科,重庆,400010;重庆医科大学附属二院普外科,重庆,400010;重庆医科大学附属二院普外科,重庆,400010 |
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基金项目: | 重庆医科大学科研创新基金 |
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摘 要: | 目的克隆血管内皮生长因子C(VEGF-C)基因,构建VEGF-C正、反义真核表达载体,鉴定并分析其基因序列。方法从处于对数生长期的人SGC-7901细胞中提取组织总RNA,用RT-PCR方法扩增出VEGF-C基因的正、反义全长cDNA。利用大肠杆菌转化并制备质粒pCI-neo和pcDNA3。分别用XbaI+EcoRⅠ及HindⅢ+EcoRⅠ双酶切两组质粒和VEGF-C cDNA,并将正、反义VEGF-C cDNA克隆到真核表达载体pcDNA3和pCI-neo中。酶切鉴定、质粒双向测序鉴定重组基因。结果扩增出VEGF-C基因全长cDNA,大小约1.3kb。克隆出正、反义重组质粒为pcDNA3-sense VEGF-C,pCI-neo-antisense VEGF-C,电泳结果显示条带大小约6.8kb。碱基测序证实重组质粒中导入的DNA片段碱基序列与预期的设计路线相符且两片段互补、方向相反。结论正确克隆VEGF-C基因,成功构建了VEGF-C正、反义真核表达载体,为下一步研究反义VEGF-C转染VEGF-C基因高表达的肿瘤细胞后对其体外生长的影响创造了条件,也为进一步研究VEGF-C在胃癌新生淋巴管的形成和转移中的作用奠定了基础。
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关 键 词: | 血管内皮生长因子C 载体构建 |
Construction and identification of sense and antisense eukaryotic expression vectors of human vascular endothelial growth factor-C |
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Abstract: | |
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Keywords: | |
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