犬传染性肝炎核酸疫苗的构建及免疫效果评价

目的获得犬传染性肝炎保护性抗原Loop重组蛋白及pVAX1-CpG-Loop重组质粒，并评价其诱导特异性免疫应答的水平。方法PCR扩增犬腺病毒Ⅰ型抗原表位Loop基因，构建至原核表达载体pET28a（＋）和真核表达载体pVAX1-CpG（＋）中；pET28a-Loop重组质粒转化BL21（DE3），表达蛋白经SDS-PAGE、免疫印迹分析、亲和层析纯化抗原蛋白，采用肌内注射、电转导方法，prime-boost免疫策略，pVAX1-CpG-Loop重组质粒股四头肌注射免疫小鼠，抗原蛋白加强免疫后进行免疫效果的评价。结果ELISA方法检测到免疫鼠体内有特异性抗体产生，淋巴细胞增殖实验（MTT和CCK-8）、细胞因子和CD^4＋、CD^8＋分子测定表明DNA疫苗可以诱发TH1型免疫；中和实验表明表达蛋白诱导小鼠产生的抗体具有中和病毒的作用。结论构建的犬传染性肝炎pVAX1-CpG-Loop核酸疫苗具有诱导特异性细胞和体液免疫应答的能力。