血管紧张素原基因部分多态性指标与原发性高血压的发病风险：社区病例对照

背景：血管紧张素原基因是第一个被发现的原发性高血压候选基因，T174M5和M235T多态均位于AGT基因第二外显子，且存在连锁不平衡。启动子区域A-6G和G-217A位点多态对其基因表达起重要调节作用，且血管紧张素原基因的表达产物与血压水平的维持密切相关。目的：探讨血管紧张素原基因A-6G-T174M和G-217A位点多态性与中国汉族人群原发性高血压发病风险的关系。设计：整群抽样，病例一对照分析。单位：南京医科大学第一附属医院老年医学科与心血管科，国家人类基因组南方研究中心，江苏省东台市人民医院心血管科。对象：实验于2005—09／10在江苏省东台市农村完成。①263例实验对象均来自江苏省盐城市东台县农村，其中原发性高血压组177例为未经药物治疗的原发性高血压患者，高血压的诊断参照1999年WHO／ISH高血压诊断标准（收缩压≥140mmHg和／或舒张压≥90mmHg）；正常对照组86例。②纳入标准：实验对象为汉族；长期居信本地非外来人口；能清楚回答问题；经病史、临床症状、体征及辅助检查确诊；统一问卷面访调查资料完整。③排除标准：原发性高血压组排除继发性高血压，正常对照组排除高血压家族史，同时两组人群均排除肝、肾慢性疾病和糖尿病。方法：采集外周静脉血3mL，用FlexiGene DNA Kit（250）提取人外周血中DNA。应用primer3软件进行引物设计，并排除引物序列中的多态位点。多重聚合酶链反应扩增后，取3μL反应产物用琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果，扩增成功的聚合酶链反应产物用QIAquick PCR Purification Kit纯化，纯化后的产物用DNase I片段化，片段化的酶切产物以脱氧核苷酸末端转移酶进行荧光素标记。每个单核苷酸多态各设计2条等位基因特异性探针和1条错配探针，芯片用OmniGrid^TM100点样仪制备，每个探针重复3次，形成3个阵列。杂交液95℃变性10min后。立即置于冰上冷切，取10μL杂交液加入到芯片矩阵上，50℃杂交2h，然后洗涤，甩干。GenePix 4000B共聚焦激光扫描仪进行芯片扫描，利用GenePix Pro提取得到每条探针的荧光信号强度值，通过计算每个单核苷酸多态的等位基因分数判断基因型。主要观察指标：①两组血管紧张素原基因各多态位点基因型分布频率的比较。②血管紧张素原基因A-6G和T174M位点多态性与原发性高血压发病风险的相关分析。③两组血管紧张素原基因A-6G,T174M和G-217A位点多态性对血压的影响。结果：按意向处理分析，263例实验对象均进入结果分析。①血管紧张素原基因A-6G位点AA，AG，GG基因型（P=0．014）以及A，G等位基因频率（P=0．004，OR=0．44）差异明显；T174M位点CC，CT，TT基因型（P=0．031）以及C，T等位基因频率（P=0．014，OR=0．55）差异有显著性意义；未发现G-217A位点GG，AG，AA基因型（P=0．722）以及G，A等位基因频率（P=0．403，OR=0．80）有明显差异。②携带A-6G多态AA基因型和T174M多态CC基因型的个体发生原发性高血压的风险分别减少57％（95％可信区间：0．23-0．82，P=0．010）和56％（95％可信区间=0．25～0．79，P=0．006）。③两组血管紧张素原基因A-6G，T174M和G-217A位点各基因型的收缩压、舒张压和平均动脉压的差异均无显著性意义（F=0．100～2．911，P均〉0．05）。结论：血管紧张素原基因A-6G位点AA基因型和T174M位点CC基因型可能会减少中国汉族人群原发性高血压发病风险，未发现G-217A多态基因型与其有显著相关性。