| 摘 要： | 目的本研究将以喹诺酮类代表药物氧氟沙星为研究对象,以藻酸微囊包被立体培养的幼龄兔关节软骨细胞为试验模型,从β1整合素功能、ERK/MAPK信号通路方面探讨QNs致幼龄动物关节软骨损伤的可能机制。方法藻酸微囊包被3周龄新西兰兔关节软骨细胞,培养4d后给予10μg/ml的氧氟沙星,用免疫共沉淀试验、荧光双染凋亡定量试验以及Westernblot研究氧氟沙星是否会对软骨细胞β1整合素功能和ERK/MAPK信号通路有影响。结果与对照组相比,各个时间点的β1整合素mRNA水平基本没有变化;但是,在同样条件下,从作用48h开始,氧氟沙星就使β1整合素的蛋白表达明显下降;10μg/ml的氧氟沙星作用48h后,β1整合素的胞浆域不能与胞内激活的信号蛋白进行相互作用;在补充足够镁离子的条件下,10μg/ml氧氟沙星不能诱导微囊包被软骨细胞凋亡以及使β1整合素表达下降;从作用48h开始,10μg/ml氧氟沙星就使ERK/MAPK通路的关键信号蛋白Grb2和phospho-ERK1/2的表达显著降低;在同样的时间点,尽管对Caspase-3进行了特异性抑制,但是氧氟沙星还是显著地降低了phospho-ERK1/2和β1整合素的表达水平;ERK/MAPK信号通路的特异抑制剂U0126以浓度依赖的方式引起微囊包被软骨细胞凋亡。但是,在同样条件下,β1整合素的表达水平则没有改变。结论氧氟沙星可能通过影响关节软骨细胞的β1整合素功能而抑制了ERK/MAPK信号通路,从而最终导致凋亡。
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