甲氧基聚乙二醇衍生物与抗OX40L单抗双诱导移植物免疫耐受

背景:甲氧基聚乙二醇可在淋巴细胞表面形成空间位阻而遮蔽T细胞表面抗原:OX40及其配体OX40L是一对重要的协同刺激信号分子,阻断该信号通路可使T细胞处于无反应性的失能状态,诱导免疫耐受.目的:为获得更为理想的免疫耐受状态,检测甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亚胺丙酸酸酯(methoxy-polyethyleneglycol-succinimidyl-propionic acid ester,mPEG-SPA)化学修饰联合抗OX40L单抗对移植物T淋巴细胞增殖、表型及分泌细胞因子的影响.设计、时间及地点:对比观察移植物免疫耐受体外实验,于2006-12/2007-06在徐州医学院附属医院血液病研究室完成.材料:清洁级近交系C57BL/6(H-2b)雄性和BALB/c(H-2d)雌性成年小鼠各12只,制备的脾淋巴细胞分别作为反应细胞和刺激细胞.mPEG-SPA为北京凯正公司产品,大鼠抗小鼠OX40L单抗为eBioscicnce公司产品.方法:将反应细胞密度调整为4×109 L-1,分别加入3,6,12,15,18 g/L mPEG-SPA修饰1 h,以加入相同体积的磷酸盐缓冲液作空白对照;另向反应细胞中加入15g/L mPEG-SPA分别修饰1 h,24 h,48 h,96 h,120 h,流式细胞仪检测脾淋巴细胞表面CD3分子的表达.单向混合淋巴细胞培养分4组:细胞对照组,单纯加入刺激细胞 反应细胞:抗OX40L单抗组,向两种细胞中加入10 mg/L抗OX40L单抗:mPEG-SPA组,向两种细胞中加入15 g/L mPEG-SPA;联合组,向两种细胞中加入抗OX40L单抗和mPEG-SPA.主要观察指标:CD3分子的表达水平,其反映mPEG-SPA遮蔽脾淋巴细胞的效果.淋巴细胞增殖情况与表型分析.培养上清细胞因子含量.结果:①不同浓度mPEG-SPA修饰后淋巴细胞表面CD3分子的表达均明显低于空白对照,且15,18 g/L mPEG-SPA降低幅度尤为明显(P<0.05):15g/L mPEG-SPA修饰不同时间后CD3分子的表达无变化(F=1.715,P>0.05).与细胞对照组比较,抗OX40L单抗组、mPEG-SPA组、联合组对淋巴细胞的增殖抑制率均明显升高,联合组抑制效果最强(P<0.01);抗OX40L单抗组、mPEG-SPA组T细胞表型CD4 CD25 ,CD8 CD25 比值无明显变化(P>0.05),联合组明显降低(P<0.05).抗OX40L单抗组、mPEG-SPA组、联合组γ-干扰素含量均明显低于细胞对照组,且联合组降低幅度更为显著(P<0.05);联合组自细胞介素4含量明显高于细胞对照组(P<0.05).结论:甲氧基聚乙二醇衍生物可明显遮蔽淋巴细胞表面抗原,且对抗原的遮蔽作用较持久;其与抗OX40L单抗联合应用能够阻断T细胞激活的抗原和共刺激双信号通路,抑制T细胞的增殖活性,使Th0类细胞向Th2类细胞偏离.

Immune tolerance of transplants induced by the combination of methoxy polyethylene glycol and anti-OX40L monoclonal antibody