应用巢式PCR法克隆N端部分缺失的IκBα基因

目的：克隆中国人N端部分缺失的IκBα基因，为进一步应用其进行抗肿瘤基因治疗研究打下基础，方法：从中国人外周血中分离单核细胞，采用多聚赖氨酸贴壁刺激0．5h后提取总RNA，应用逆转录PCR法，以自行设计的引物扩增全序IκBα基因，应用巢式PCR法扩增N端部分缺失的IκBα基因，用TA克隆技术将目的基因连接到pGEM-T质粒载体中，进行测序并与已知IκBα序列进行同源性分析。结果：测序结果表明我们所克隆的目的基因，其基因序列与GenBank中人IκBα基因序列仅有5个碱基不同但所编码氨基酸仅1个发生改变。结论：已成功克隆了中国人N端部分缺失的IκBα基因，为进一步应用N端部分缺失的IκBα基因进行抗肿瘤基因治疗研究打下了基础。