α肿瘤坏死因子(TNFα)基因的分离鉴定及在人肝癌细胞中的表达 |
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作者姓名: | 冯学胜 郑仲承 戈凯 王立群 汤钊猷 刘新垣 |
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作者单位: | 上海医科大学肝癌研究所,中国科学院上海生物化学研究所 |
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基金项目: | 中华医学会93583肝癌项目,中国8631021605基金 |
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摘 要: | 应用不连续密度梯度法分离获得人肝癌浸润性单个核细胞(TIM),RNA斑点杂交提示TIM中有明显的TNFαmRNA转录。经RT-PCR扩增反应分离得到一特异的700bp左右的DNA片段,DNA序列分析证实这一DNA片段中包含编码人TNFα成熟肽所需的的全部cDNA序列。将这一人TNFαcDNA克隆到真核细胞表达质粒pSVK3,获得真核细胞表达重组pSVK3-tnf,用磷酸钙沉淀法将pSVK3-tnf导入人肝癌细胞SMMC7721中的细胞培养上清中可检测到TNFα的一过性表达。结果提示TIM可成为获取TNFα基因的来源,获得的pSVK3-tnf重组质粒为肝癌的基因治疗奠定了基础。
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关 键 词: | 肿瘤浸润性单个核细胞;肿瘤坏死因子;基因制备;肝细胞性肝癌 |
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