人宫颈癌HeLa细胞氧化损伤中溶酶体与线粒体损伤的时间顺序及其意义 |
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作者姓名: | 于春艳 刘希 于春荣 张钰 苏静 刘玉和 |
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作者单位: | (1.北华大学基础医学院病理学教研室,吉林 吉林132013;2. 北华大学化学与生物学院实验中心,吉林 吉林 132013;3.北京昭衍新药研究中心有限公司毒理部,北京 1001764.吉林大学白求恩医学院病理生理学教研室,吉林 长春 130021) |
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基金项目: | 国家自然科学基金资助课题(81202552,81272876);吉林省教育厅科研基金资助课题(吉教科合字2011第117号,吉教科合字2012第394号);吉林省科技厅自然科学基金资助课题(201215103) |
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摘 要: | 目的: 探讨溶酶体及线粒体死亡途径在氧化应激诱导HeLa细胞凋亡过程中的时间顺序及其意义,阐明溶酶体膜通透性在氧化应激诱导线粒体凋亡过程中的重要作用。方法:以对数生长期人宫颈癌HeLa细胞作为研究对象,利用维生素K3(VK3)复制氧化应激模型,实验分为对照组、VK3 1 h、VK3 3 h、VK3 6 h和VK3 12 h作用组。MTT 法检测各组细胞生存率;′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)染色检测细胞内活性氧(ROS)水平,吖啶橙(AO)染色观察溶酶体膜通透性,罗丹明123染色检测线粒体膜电势(ΔΨm),Western blotting法检测凋亡相关蛋白caspase-3活化片段的表达。结果:与对照组比较,VK3 6和12 h组HeLa细胞生存率降低(P<0.05)。Western blotting法检测,与对照组比较,VK3 6和12 h组HeLa细胞内caspase-3活化片段表达水平增加(P<0.05)。DCFH-DA染色,VK3作用1、3及6 h ,HeLa细胞内绿色荧光增强。AO染色,VK3 3 h 和6 h组可见HeLa细胞的溶酶体内红色颗粒状荧光减弱,细胞浆绿色荧光增强。罗丹明123染色,VK3 6 h组可见HeLa细胞浆内红色荧光强度明显降低(提示ΔΨm下降)。结论:氧化损伤能够诱导溶酶体及线粒体死亡途径,并且溶酶体的变化先于线粒体,提示溶酶体通透性在氧化应激诱导线粒体凋亡过程中具有重要作用。
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关 键 词: | 氧化应激 溶酶体 线粒体 细胞凋亡 |
收稿时间: | 2013-03-14 |
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