| 大鼠pEGFP-PLZF真核载体的构建及在精原细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 夏 伟,白 杨,叶哲伟,曾甫清,邬 喻. 大鼠pEGFP-PLZF真核载体的构建及在精原细胞中的表达[J]. 南京医科大学学报(自然科学版), 2007, 27(8): 831-834842 |
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| 作者姓名： | 夏 伟 白 杨 叶哲伟 曾甫清 邬 喻 |
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| 作者单位： | [1]华中科技大学同济医学院协和医院泌尿外科,湖北武汉430022 [2]华中科技大学同济医学院协和医院骨科,湖北武汉430022 |
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| 摘 要： | 目的:构建真核表达重组质粒pEGFP-N1-PLZF,并了解其在大鼠精原细胞中的融合蛋白表达情况.方法:参考分子克隆技术,采用RT-PCR的方法从大鼠睾丸组织中扩增早幼粒细胞白血病锌指蛋白(PLZF),将该基因连接克隆到含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的真核表达载体pEGFP-N1上,并用双酶切、测序进行鉴定;将重组质粒用脂质体转染的方法导入精原细胞中,观察有无荧光的表达及用Western blot检测蛋白表达情况.结果:实验从大鼠睾丸组织中获取了编码plzf基因的全序列cDNA,产生了2 kb的目的插入片段,与pEGFP-N1载体连接后经酶切电泳鉴定及DNA测序证实序列正确;重组质粒转染精原细胞24 h后在荧光显微镜下观察到绿色荧光,并用Western 1blot:检测到106 kD目的蛋白的表达.结论:新构建的重组质粒pEGFP-N1-PLZF通过鉴定,结构正确.转染到精原细胞后能在其中表达,发挥功能,为后续研究奠定了基础,对研究PLZF调控精原细胞增殖和分化机制具有重要的意义.
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| 关 键 词： | 早幼粒细胞白血病锌指蛋白 重组质粒 绿色荧光蛋白 精原细胞 大鼠 真核载体 精原细胞 表达 eukaryotic expression Vector 意义 分化机制 细胞增殖 调控 研究 功能 质粒转染 结构 过鉴 蛋白 绿色荧光 镜下观察 荧光显微 重组 实序列 |
| 文章编号： | 1007-4368（2007）08-0831-05 |
| 收稿时间： | 2007-01-12 |
| 修稿时间： | 2007-01-12 |
Construciton of pEGFP-N1-PLZF eukaryotic expression vector and its expression in spermatogonia |
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| XIA Wei,BAI Yang,YE Zhe-wei,ZENG Fu-qing and WU Yu. Construciton of pEGFP-N1-PLZF eukaryotic expression vector and its expression in spermatogonia[J]. Acta Universitatis Medicinalis Nanjing, 2007, 27(8): 831-834842 |
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| Authors: | XIA Wei BAI Yang YE Zhe-wei ZENG Fu-qing WU Yu |
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| Affiliation: | Department of Urology;1 Department of Orthopedics;Union Hospital of Tongji Medical College;Huazhong University of Science and Technology;Wuhan 430022;China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | PLZF recombinant plasmid green fluorescent protein spermatogonia |
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