| 起搏基因质粒的构建及体外转染心肌细胞的研究 |
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| 引用本文： | 牛萍,赵月强,黄星原.起搏基因质粒的构建及体外转染心肌细胞的研究[J].细胞与分子免疫学杂志,2011,27(3). |
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| 作者姓名： | 牛萍 赵月强 黄星原 |
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| 作者单位： | 1. 武汉大学人民医院,儿科,湖北,武汉,430060
2. 武汉大学人民医院,整形外科,湖北,武汉,430060 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目，教育部高等学校博士学科点专项科研基金资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:构建重组起搏基因质粒pIRES2-EGFP-HCN2, 并检测其在体外心房肌细胞中的表达, 探讨其构建生物起搏器的可行性.方法:对含mHCN2 cDNA的Pm载体进行转化和扩增, 将所得mHCN2基因定向克隆到真核表达载体plRES2-EGFP中, 进行双酶切来鉴定克隆的正确性.将重组质粒用电穿孔法转染心房肌细胞, 通过免疫荧光及RTPCR检测重组质粒pIRES2-EGFP-HCN2在体外心房肌细胞中的表达情况.而对照组仅转染pIRES2-EGFP.结果:构建了重组质粒plRES2-EGFP-HCN2.荧光显微镜下可见转染起搏基因后的心房肌细胞呈绿色荧光, 其搏动频率较未转染的细胞及对照组明显增快(180士11次/分vs140±14次/分vs143±12次/分, P<0. 05).实验组RT-PCR及免疫荧光显示 了mHCN2 mRNA基因及蛋白的表达, 而对照组未见到该基因片段及其荧光表达.结论:成功地构建了重组质粒pIRES2-EGFP-HCN2, 并在体外心房肌细胞中成功表达, 为生物起搏的研究奠定基础.
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| 关 键 词： | 起搏 增强型绿色荧光蛋白 心肌细胞 转染 |
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