| pcDNA3.1-Smac真核表达载体的构建及表达 |
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| 引用本文： | 秦思达,任宏,李晓军,杨成成,杨斌,张湘忠,李世森,胡丽娟.pcDNA3.1-Smac真核表达载体的构建及表达[J].细胞与分子免疫学杂志,2011,27(2). |
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| 作者姓名： | 秦思达 任宏 李晓军 杨成成 杨斌 张湘忠 李世森 胡丽娟 |
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| 作者单位： | 西安交通大学医学院第一附属医院肿瘤中心,陕西西安,710061 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目资助，陕西省攻关项目资助 |
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| 摘 要： | 目的:构建人的smac基因真核表达载体pcDNA3.1-Smac,并在肺腺癌A549细胞中表达.方法:采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从人睾丸组织中扩增到smac基因,构建重组真核表达载体pcDNA3.1-Smac.酶切及测序鉴定重组质粒正确后,脂质体介导转染至肺腺癌A549细胞中.采用RT-PCR、Western blot法检测外源基因smac的表达,MTT法检测细胞生长抑制率.结果:PCR扩增片段与预期片段大小相符,插入片段测序结果与GenBank公布的一致,表明人smac基因克隆及真核表达载体peDNA3.1-Smac构建成功.在mRNA水平和蛋白水平,转染后的细胞中外源基因smac表达均明显增加.转染smac质粒72 h后,细胞的生长抑制率较转染空质粒组显著增加.结论:成功构建重组真核表达载体peDNA3.1-Smac,并在肺癌A549细胞中进行了表达;验证了转染后对肺癌细胞生长有抑制作用.
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| 关 键 词： | smac基因 细胞转染 真核表达载体 A549细胞 |
Construction and expression of eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1-smac |
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| QIN Si-da,REN Hong,LI Xiao-jun,YANG Cheng-cheng,YANG Bin,ZHANG Xiang-zhong,LI Shi-sen,HU Li-juan.Construction and expression of eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1-smac[J].Journal of Cellular and Molecular Immunology,2011,27(2). |
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| Authors: | QIN Si-da REN Hong LI Xiao-jun YANG Cheng-cheng YANG Bin ZHANG Xiang-zhong LI Shi-sen HU Li-juan |
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