重组人纽兰格林二硫键分析

目的：应用多种质谱技术确证重组人纽兰格林（rhNRGL）的一级结构及其二硫键定位。方法：（1）利用Q—FT—MS测定rhNRGL二硫键还原前后的精确相对分子质量，确定分子中二硫键数目；（2）应用MALDI—TOF／TOF—MS法测定rhNRGL的N端序列；（3）用ESI-MS／MS法测定rhNRGL的C端序列；（4）通过Trypsin和Glu—C2种蛋白酶进行酶解，获得肽质量指纹谱，确证其序列及定位3对二硫键。结果：（1）测定rhNRGL还原前后的精确相对分子质量，两者相差6．0516，确证其主成分形成了3对二硫键；（2）串联质谱法测定rhNRGL的N端序列的5个氨基酸和C端序列的11个氨基酸，均与理论序列一致；（3）2种酶切肽谱的序列覆盖率分别为82％和64％，分析确证主成分二硫键配对正确，但同时存在少量错配二硫键异构体。结论：以上结果表明，该样品的一级结构正确，主要二硫键模式为：1—3，2—4，5—6。多肽药物的二硫键分析常常需要多种质谱及样品制备技术联合。