| 周期型马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氢酶基因真核表达载体的构建及DNA免疫研究 |
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| 引用本文： | 童海燕,方政,谢东方,黄为群,方浩,徐邦生. 周期型马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氢酶基因真核表达载体的构建及DNA免疫研究[J]. 中华传染病杂志, 2009, 27(12). DOI: 10.3760/cma.j.issn.1000-6680.2009.12.004 |
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| 作者姓名： | 童海燕 方政 谢东方 黄为群 方浩 徐邦生 |
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| 作者单位： | 南通大学医学院寄生虫学教研室,226001 |
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| 基金项目： | 江苏省社会发展科技计划 |
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| 摘 要： | 目的 构建周期型马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氢酶(BmGAPDH)真核表达载体pcDNA3.1-BmGAPDH,并观察其在小鼠体内的细胞免疫应答效应.方法 以周期型马来丝虫总RNA为模板,RT-PCR方法扩增目的 基因片段.与pGEM-T Easy克隆载体连接,筛选出阳性克隆.经PCR和双酶切鉴定后,亚克隆至真核表达质粒pcDNA3.1,构建pcDNA3-BmGAPDH表达载体,将纯化的pcDNA3.1-BmGAPDH和CpG经后腿胫前肌免疫BALB/c小鼠,并设PBS对照组及空质粒对照组,共免疫3次,每次免疫间隔2周.用RT-PCR方法检测肌肉组织内目的 基因;用噻唑蓝(MTT)法、ELISA方法分别检测免疫小鼠T淋巴细胞刺激增殖指数和血清中细胞因子IFN-γ、IL-4水平.应用SPSS统计学软件进行样本均数的t检验.结果 成功构建了pcDNA3.1-BmGAPDH真核表达载体,基因片段全长为1020 bp.DNA序列分析与基因库已知基因序列同源性为99%.该真核表达载体免疫小鼠后,从小鼠肌肉组织扩增出目的 基因重组质粒组小鼠淋巴细胞刺激增殖指数显著高于PBS对照组及空质粒对照组,淋巴细胞刺激增殖指数分别为1.398、1. 006和1.017(P<0.05).重组质粒组IFN-γ、IL-4细胞因子水平均高于PBS对照组及空质粒对照组,分别为163.905、58.589、51.317 ng/L和107.906、27.111、34.627 ng/L(P<0.05).免疫佐剂CpG与疫苗同时注射可增强机体的免疫应答,表现为IFN-γ水平和免疫4周后淋巴细胞刺激增殖指数显著上升.结论 pcDNA3.1-BmGAPDH真核表达载体能在小鼠体内表达并可诱导相关的细胞免疫应答.
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| 关 键 词： | 丝虫 马来 甘油醛-3-磷酸脱氢酶 基因表达 遗传载体 |
Construction of pcDNA3. 1-Brugia malayi glyceraldehyde phosphate dehydrogenase eukaryotic recombinant plasmid and study on its role in DNA immunity |
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| TONG Hai-yan,FANG Zheng,XIE Dong fang,HUANG Wei-qun,FANG Hao,XU Bang-sheng. Construction of pcDNA3. 1-Brugia malayi glyceraldehyde phosphate dehydrogenase eukaryotic recombinant plasmid and study on its role in DNA immunity[J]. Chinese Journal of Infectious Diseases, 2009, 27(12). DOI: 10.3760/cma.j.issn.1000-6680.2009.12.004 |
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| Authors: | TONG Hai-yan FANG Zheng XIE Dong fang HUANG Wei-qun FANG Hao XU Bang-sheng |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | DNA |
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