| 摘 要： | 目的观察下瘀血汤对酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)小鼠肝脏炎症和脂肪变性的改善作用,初步探讨其可能的作用机制。方法将48只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、对照美他多辛组、对照下瘀血汤组、酒精组、酒精美他多辛组和酒精下瘀血汤组,每组各8只。对照组、对照美他多辛组和对照下瘀血汤组造模过程中全程给予液体对照饲料。酒精组、酒精美他多辛组和酒精下瘀血汤组采用4周慢性乙醇喂养加急性乙醇灌胃法造模,造模第3周第1 d起,对照下瘀血汤组和酒精下瘀血汤组小鼠以0.4678 g/kg下瘀血汤灌胃,对照美他多辛组和酒精美他多辛组小鼠以2.857 mg/kg美他多辛灌胃。其余组小鼠以等体积蒸馏水灌胃。第32 d酒精组、酒精美他多辛组和酒精下瘀血汤组小鼠以31.5%乙醇灌胃,对照组、对照美他多辛组、对照下瘀血汤组小鼠以45%糊精灌胃。9 h后处死小鼠,留取静脉血和肝脏。计算各组小鼠肝体比值,检测丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、血清甘油三酯(triglyceride,TG)及肝脏TG水平。采用HE染色和油红染色观察肝脏病理形态学变化。采用免疫组织化学法检测中性粒细胞标志物髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的表达。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测肝组织白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)、白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)和单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein 1,MCP1)mRNA的相对表达量。采用Western blot和RT-PCR检测脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)、肉毒碱棕榈酰基转移酶-1α(carnitine palmitoyltransferase 1α,CPT-1α)和过氧化物酶体增殖激活受体α(peroxisome proliferator-activated receptor alpha,PPARα)的表达。结果与对照组相比,酒精组小鼠肝体比值(4.78±0.48)%vs(3.71±0.36)%]、ALT (44.71±25.37)U/L vs(20.41±7.11)U/L]、血清TG (4.16±1.27)mmol/L vs(1.44±0.23)mmol/L]和肝脏TG (27.15±6.43)mmol/g vs(10.74±9.83)mmol/g]均显著升高(P均0.05)。与酒精组相比,酒精美他多辛组和酒精下瘀血汤组小鼠ALT11.79(10.17,24.48)U/Lvs(16.76±1.64)U/Lvs(44.71±25.37)U/L]、血清TG(1.89±1.54)mmol/L vs 2.40(2.39,2.67)mmol/L vs(4.16±1.27)mmol/L]及肝组织TG (14.18±5.88)mmol/g vs 19.77(5.92,20.90)mmol/g vs(27.15±6.43)mmol/g]水平均显著降低(P均0.05),肝体比值(4.49±0.43)%vs(4.82±0.14)%vs(4.78±0.48)%]差异无统计学意义(t值分别为1.099、-0.165,P值分别为0.283、0.871)。HE和油红染色提示酒精组小鼠肝组织脂肪变性明显。免疫组织化学结果表明酒精组小鼠肝脏MPO阳染较对照组显著增加。与对照组相比,酒精组小鼠IL-6(1.95±0.74 vs 1.00±0.47)、IL-1β(2.06±0.64 vs 1.00±0.26)和MCP1(2.98±1.13 vs 0.99±0.30)及FAS 2.40±0.53 vs 0.916(0.876,1.221)] mRNA相对表达量均显著升高(z=-2.242,P=0.025;z=-3.695,P 0.001;z=-2.867,P=0.004;z=-3.838,P 0.001),CPT-1α(0.39±0.75 vs 1.00±0.22)和PPARα(0.27±0.08 vs 1.00±0.26)m RNA相对表达量显著降低(z=-4.392,P 0.001;z=-4.392,P 0.001);与酒精组相比,酒精美他多辛组和酒精下瘀血汤组IL-6(1.16±0.42 vs 0.93±0.42 vs 1.95±0.74)、IL-1β(0.75±0.19 vs 0.59±0.07 vs 2.06±0.64)、MCP1(1.27±0.25 vs 1.23±0.50 vs 2.98±1.13)及FAS(1.41±1.05 vs 1.43±0.30 vs 2.40±0.53)mRNA相对表达量均显著降低,CPT-1α0.81(0.79,0.81)vs 0.72±0.14 vs 0.39±0.75]和PPARα(0.63±0.30 vs 0.69±0.41 vs 0.27±0.08)mRNA相对表达量显著升高(P均0.05)。Western blot表明,与对照组相比,酒精组小鼠FAS蛋白相对表达量(0.56±0.07 vs 0.20±0.02)上调(z=-2.309,P=0.021),CPT-1α蛋白相对表达量(0.24±0.02 vs 1.03±0.06)和PPARα蛋白相对表达量(0.17±0.01 vs 1.02±0.08)下调(P均0.05);与酒精组相比,酒精美他多辛组和酒精下瘀血汤组FAS蛋白相对表达量(0.31±0.02 vs 0.29±0.04 vs 0.56±0.07)均显著降低,CPT-1α蛋白相对表达量(0.43±0.01 vs 0.65±0.10 vs 0.24±0.02)和PPARα(0.55±0.07 vs 0.39±0.04 vs 0.17±0.01)显著升高(P均0.05)。结论下瘀血汤可通过抑制中性粒细胞浸润及炎症反应减轻酒精引起的脂肪生成并促进脂肪酸氧化,从而发挥保护肝脏的作用。
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