| 单增李斯特菌三重实时荧光PCR检测的建立及其毒力基因在分离菌株中分布 |
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| 引用本文： | 刘二龙,袁慕云,吕英姿,陈颖,王娉,许龙岩,李嘉琪,郑高彬,杜雅萍. 单增李斯特菌三重实时荧光PCR检测的建立及其毒力基因在分离菌株中分布[J]. 中国人兽共患病杂志, 2016, 0(5): 451-456. DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2016.05.007 |
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| 作者姓名： | 刘二龙 袁慕云 吕英姿 陈颖 王娉 许龙岩 李嘉琪 郑高彬 杜雅萍 |
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| 作者单位： | 1. 黄埔出入境检验检疫局,广州,510730;2. 广东出入境检验检疫局,广州,510623;3. 中国检验检疫科学研究院,北京,100025 |
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| 基金项目： | 广东省科技计划项目(2013B040402004)，Science and Technology Planning Project of Guangdong Province |
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| 摘 要： | 目的建立同时检测单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)溶血素基因hlyA、内化素基因inlA和磷脂酶C基因plcB的TaqMan-MGB三重实时荧光PCR检测方法,并对101株单增李斯特菌的hlyA、inlA和plcB基因进行了检测,分析3个毒力基因在多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)聚类群组中的分布情况。方法根据单增李斯特菌毒力基因hlyA、inlA和plcB的保守序列设计引物和小沟结合物(minor groove binder,MGB)探针建立三重荧光PCR方法,对其特异性、灵敏度和可重复性进行了测试,并对分离的101株单增李斯特菌进行三重PCR检测。结果建立的三重实时荧光PCR方法特异于单增李斯特菌的检测,重复性良好,组内Ct值变异系数均小于1.5%,灵敏度可达100CFU/mL。对101株单增李斯特菌的hlyA、inlA和plcB的检出率分别为98%、75%和98%。在可被MLST分型的89株菌株中,groupI的30株菌株有20株均缺失inlA基因;groupII的57株菌株中有56株三个基因均检出;groupIII的菌株hlyA、inlA和plcB三个基因均未检出。结论本文建立的三重实时荧光PCR方法能准确、快速、稳定的检测单增李斯特菌,101株单增李斯特菌的hlyA、inlA、plcB三个毒力基因的检出情况与单增李斯特菌的MLST分型聚类有较一致的关系,对分析单增李斯特菌毒力的强弱有重要参考意义。
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| 关 键 词： | 单增李斯特菌 TaqMan-MGB三重实时荧光PCR 毒力基因分布 多位点序列分型 |
Development of triplex TaqMan MGB-probe real-time PCR assay for detection of Listeria monocytogenes and the distribution of virulence gene in isolates |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Listeria monocytogenes TaqMan-MGB real-time PCR distribution of virulence genes Multilocus sequence typing |
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