融合免疫佐剂Lipo多肽与包膜蛋白EDⅢ区的登革病毒四价疫苗的构建及免疫效应研究

目的构建编码免疫佐剂Lipo多肽与登革病毒1-4型包膜蛋白EDIII区的重组甲病毒载体,并在小鼠体内研究其免疫效应,为研制新型的登革病毒四价疫苗奠定基础。方法先通过GS linker将编码免疫佐剂Lipo多肽的基因序列与编码登革病毒1-4型包膜蛋白EDIII区的基因序列进行串联获得LipoEDIII;然后将LipoEDIII基因插入甲病毒载体DREP的多克隆位点,构建重组甲病毒载体DREP-LipoEDIII;将DREP-LipoEDIII转染293细胞,Western blot检测融合蛋白的表达;随后将DREP-LipoEDIII免疫ICR小鼠,不加任何佐剂,再加强免疫2次后,通过ELISA检测血清中的抗体效价和细胞因子的分泌情况来评价其免疫效应。结果成功构建了含有"融合免疫佐剂Lipo多肽与包膜蛋白EDIII区"的重组甲病毒质粒DREP-LipoEDIII。DREP-LipoEDIII免疫小鼠后可以诱导产生特异性抗体,抗体效价为1∶160。抗原刺激小鼠脾淋巴细胞可以产生IFN-r、IL-4、IL-10细胞因子,实验组的浓度明显高于对照组。结论在不需要加入任何外源佐剂的情况下,本研究构建的融合免疫佐剂Lipo多肽的登革四价疫苗能够诱导小鼠产生特异性的体液和细胞免疫应答,且以细胞免疫应答为主,为今后新型登革病毒四价疫苗的研究奠定了基础。