| 一种新型结缔组织生长因子人源单链抗体的可溶性表达以及分离纯化 |
| |
| 引用本文： | 范小波,苟丽霞,刘昭,沈子龙,刘乃丰,吴国球,奚涛. 一种新型结缔组织生长因子人源单链抗体的可溶性表达以及分离纯化[J]. 东南大学学报(医学版), 2010, 29(4): 361-366. DOI: 10.3969/j.issn.1671-6264.2010.04.002 |
| |
| 作者姓名： | 范小波 苟丽霞 刘昭 沈子龙 刘乃丰 吴国球 奚涛 |
| |
| 作者单位： | 1. 中国药科大学,生命科学与技术学院,江苏,南京,210009
2. 东南大学附属中大医院,临床检验中心,江苏,南京,210009 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 |
| |
| 摘 要： | 目的：研究单链抗体（scFv）在不同载体和菌株中的表达以及表达产物的免疫学活性评价。方法：将人源化单链抗体的基因通过酶切、连接等生物技术的方法克隆到pET28a、pET32a和pET-EI：X3种不同的载体中,并选用不同的表达菌株进行表达,观察单链抗体的表达情况并对抗体的可溶性表达进行优化,采用亲和层析和分子筛层析对目的蛋白进行纯化,并在体外研究目的蛋白的生物学活性。结果：抗结缔组织生长因子单链抗体在pET28a/BL21（DE3）中不能表达,在pET32a/BL21（DE3）和pET-EI：X/BLR（DE3）中均成功表达,但是在pET-EI：X/BLR（DE3）中scFv抗体无法从内含肽（intein）上裂解。scFv在pET32a/BL21（DE3）中表达量占总蛋白的30%左右,经过两步层析纯化后纯度达到85%以上。体外免疫试验显示,目的蛋白具有良好的免疫学活性。结论：人源化抗结缔组织生长因子单链抗体scFv在大肠杆菌中的表达需要分子伴侣,通过低温表达策略在pET32a/BL21（DE3）中成功得到表达。
|
| 关 键 词： | 人源单链抗体 结缔组织生长因子 弹性蛋白 分离纯化 |
Soluble expression and purification of a novel single-chain Fv antibody against connective tissue growth factor(CTGF/CCN2) |
| |
| FAN Xiao-bo,GOU Li-xia,LIU Zhao,SHEN Zi-long,LIU Nai-feng,WU Guo-qiu,XI Tao. Soluble expression and purification of a novel single-chain Fv antibody against connective tissue growth factor(CTGF/CCN2)[J]. Journal of Southeast Univ: Medical Sci Ed, 2010, 29(4): 361-366. DOI: 10.3969/j.issn.1671-6264.2010.04.002 |
| |
| Authors: | FAN Xiao-bo GOU Li-xia LIU Zhao SHEN Zi-long LIU Nai-feng WU Guo-qiu XI Tao |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | |
| 本文献已被 维普 万方数据 等数据库收录！ |
|
