逆转录病毒载体转染的人凝血因子Ⅸ基因在人脐带组织源间充质干细胞中的表达 |
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作者姓名: | 陈晓梨 董春兰 冯小明 陈振萍 周泽平 许显辉 赵钦军 邱志勇 任倩 张蕾 韩忠朝 |
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作者单位: | 中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室,天津,300020 |
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基金项目: | 国家高技术研究发展计划(863计划),国家自然科学基金 |
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摘 要: | 为了研究逆转录病毒(pLEGFP—N1)转染的人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)基因在人脐带间充质干细胞中的表达,应用DNA重组技术将hFⅨ cDNA构建入pLEGFP—N1载体,转导入包装细胞系Pheonix细胞,应用病毒上清感染人脐带组织源间充质干细胞(hUCT—MSCs),经G418筛选10天后获得全部的转染阳性细胞,从蛋白质水平和其功能活性上检测hFⅨ的表达。结果显示:配养上清液中可检测到hFⅨ的表达,每24小时分泌量达2.68±0.36μg/10^6细胞。Westernblot检测表明,转导hFⅨ的hUCT—MSCs能分泌预期分子大小的hFⅨ入上清。功能性凝集测定实验表明了转导F/X的hUCT—MSCs 2天培养上清中hFⅨ的活性为100%-130%。结论:pLBGVe—N1-hFⅨ能有效地转导hUCT—MSCs,并在其子代细胞中表达具有凝血活性的hFⅨ,这为hUCT—MSCs成为血友病B基因治疗的细胞载体研究奠定了基础。
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关 键 词: | 逆转录病毒 人凝血因子Ⅸ 人脐带组织源间充质干细胞 基因治疗 血友病B |
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