hBMP—4瞬时转染对家兔骨髓基质干细胞生物学行为的影响

目的：应用兔骨髓基质干细胞（bone marrow stromal cells，MSCs）作为基因治疗的靶细胞，体外转染人骨形成蛋白4(human bone morphogentic protein-4，hBMP-4)基因，观察瞬时转染对兔MSCs生物学行为的影响。方法：贴壁法培养兔MSCs，分别在体外转染pEGFP-hBMP-4和pEGFP基因并留置空白对照。检测转染效率及目的基因的转录和表达，观察细胞形态及生长情况，检测碱性磷酸酶、钙结节及骨钙素等成骨细胞表型。结果：基因转染效率达到20％-30％，RT-PCR显示MSCs本身有目的基因的少量转录，转染pEGFP-hBMP-4后转录增强。目的基因转染后细胞形态略有变化，生长曲线与对照组相似，碱性磷酸酶阳性染色面积增加（P=0.0016），钙结节增多（P=0.0001），骨钙素表达增强（P=0.03）。结论：优化的条件下取得了较高的转染效率，hBMP-4基因转染可以增强目的基因的转录，加速MSCs向成骨细胞表型转化。HBMP-4转染的MSCs可望成为组织工程化骨理想的种子细胞。