甘精胰岛素干预游离脂肪酸诱导RIN-m细胞凋亡的变化

目的：观察甘精胰岛素对游离脂肪酸诱导的β细胞(RIN—m细胞)凋亡是否具有保护作用，并与普通胰岛素及胰岛素样生长因子1的干预效果进行对比。方法：本实验于2004—05／2004—10在中山大学附属第二医院林百欣医学科学研究中心完成。RIN—m细胞被培养并常规培养传代。诱导凋亡接种于6孔板或者96孔板后常规培养2d，待细胞长至70％满左右时，吸去培养基，加入含10g／L血清白蛋白，10mL／L乙醇，20mL／L胎牛血清的培养基(正常对照组)，或者含10g／L血清白蛋白，体积分数为0．01乙醇、体积分数为0．02胎牛血清和0．3mmol／L棕榈酸的培养基(凋亡对照组)，或者含10g／L牛血清白蛋白，体积分数为0．01乙醇、体积分数为0．02胎牛血清，0．3mmol／L棕榈酸以及100nmol／L甘精胰岛素(甘精胰岛素组)或者100nmol／L普通胰岛素(普通胰岛素组)或者10nmol／L胰岛素样生长因子1组的培养基，孵育24h后，将细胞接种于6孔板，诱导细胞凋亡。采用Hoechst33342染色、流式细胞仪以及酶联免疫吸附反应方法检测各组RIN-m细胞的凋亡，吸光度值代表细胞裂解液中核小体的数量，即DNA断裂的数量。结果：0．3mmol／L棕榈酸孵育后RIN-m细胞出现核皱缩、碎裂等典型凋亡表现。①甘精胰岛素组、普通胰岛素组、胰岛素样生长因子1组亚二倍体细胞比率(32．00&;#177;3．08)％，(35．97&;#177;3．14)％，(25．25&;#177;1．66)％]明显高于正常对照组(3．28&;#177;1．44)％](P&;lt;0．01)；但明显低于凋亡对照组(42．10&;#177;4．24)％(P&;lt;0．01)。②甘精胰岛素组、普通胰岛素组、胰岛素样生长因子1组细胞裂解液中核小体的数量(A值)(2．372&;#177;0．21，2．758&;#177;0．20，1．704&;#177;0．16)明显高于正常对照组(0．341&;#177;0．023)(P&;lt;0．01)；但明显低于凋亡对照组(3．333&;#177;0．23)(P&;lt;0．01)。甘精胰岛素组和胰岛素样生长因子1组裂解液中核小体的数量(A值)明显低于普通胰岛素组(P&;lt;0．05)。结论：甘精胰岛素对游离脂肪酸诱导的B细胞凋亡具有抑制作用，该种作用强于普通胰岛素。