| 摘 要： | 目的构建靶向CD74基因的小发夹RNA慢病毒载体,感染胰腺癌Capan-2细胞株,筛选并建立稳定细胞株。方法应用q RT-PCR法检测不同胰腺癌细胞株间CD74的m RNA表达情况;根据Gene Bank提供的CD74 c DNA序列,设计3条靶向CD74的si RNA序列,构建重组干扰质粒p SUPERretro-puro-CD74-si RNA;将重组干扰质粒转染Capan-2细胞,经过q RT-PCR和Western blot法筛选出最佳干扰效果质粒;慢病毒包装质粒并感染Capan-2细胞株,利用嘌呤霉素筛选,建立稳定低表达CD74细胞株;应用q RT-PCR和Western blot法检测CD74基因m RNA和蛋白的表达抑制率。结果 Capan-2细胞株的CD74 m RNA平均ΔCt值为102.9±6.4,在各胰腺癌细胞株中表达水平最高(P<0.05);携带干扰效果最高si RNA的慢病毒感染Capan-2细胞,建立了稳定低表达CD74基因的Capan-2细胞株,CD74基因m RNA抑制率61%,蛋白抑制率90%。结论成功筛选出靶向CD74的sh RNA最佳干扰质粒,构建了CD74-RNAi慢病毒载体,并稳定感染建立了低表达CD74基因的Capan-2细胞株。
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