| 大肠杆菌菌株(λ衍生噬菌体)/PBR322衍生质粒作为人IL-6表达系统的研究 |
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| 引用本文： | 狄凯军,刘世广,章秋珩,章静波.大肠杆菌菌株(λ衍生噬菌体)/PBR322衍生质粒作为人IL-6表达系统的研究[J].解剖学报,1998,29(4). |
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| 作者姓名： | 狄凯军 刘世广 章秋珩 章静波 |
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| 作者单位： | 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所,北京,100005 |
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| 摘 要： | 为探索人白细胞介素－６（ＩＬ－６）在原核细胞中高效表达的途径，选用ＢＬ２１（ＤＥ３）／ＰＥＴ－２８作为表达系统，以聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增了ｈＩＬ－６的互补ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）的编码区，引入了ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ位点。用限制性内切酶ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切后，克隆于ＰＥＴ－２８载体的相应位点，转化ＤＨ５α。选出阳性克隆，经ＤＮＡ序列分析，表明其编码区内无非特异突变。将重组质粒转入ＤＨ５α，筛选阳性克隆，用异丙基硫代－β－Ｄ－半乳糖苷（ＩＰＴＧ）进行诱导表达。全细菌裂解液进行十二烷基黄酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ），结合固化蛋白质的免疫学测定（Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ）杂交进行分析。结果表明：Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ杂交发现有与抗ＩＬ－６特异结合的蛋白带，以４ｈ的产量最多，激光扫描显示ＩＬ－６的吸收峰占总吸收面积的３７％（４ｈ诱导）。分子量约为２７ｋＤ。实验显示，人ＩＬ－６在原核细胞中实现了高效表达，表达产物具有ＩＬ－６的免疫活性
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| 关 键 词： | 白细胞介素-6（IL-6） 大肠杆菌（λ衍生噬菌体）［BL21（DE3）］ 聚合酶链反应（PCR） |
THE STUDY OF BL21(DE3)/PET-28 AS AN EXPRESSION SYSTEM OF HUMAN IL-6 |
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| Di Kaijun,Liu Shiguang,Zhang Qiuheng,Zhang Jingbo.THE STUDY OF BL21(DE3)/PET-28 AS AN EXPRESSION SYSTEM OF HUMAN IL-6[J].Acta Anatomica Sinica,1998,29(4). |
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| Authors: | Di Kaijun Liu Shiguang Zhang Qiuheng Zhang Jingbo |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Interleukin 6 BL21(DE3) Polymerase Chain Reaction(PCR) |
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