| 构建SPA和SPG单结构域随机组合噬菌体展示文库 |
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| 引用本文： | 黄德圣,潘卫,曹洁,庞强,唐萍,廖文婷,李存枚,陈秋莉,邓松华. 构建SPA和SPG单结构域随机组合噬菌体展示文库[J]. 安徽医科大学学报, 2010, 45(6): 729-733. DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2010.06.001 |
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| 作者姓名： | 黄德圣 潘卫 曹洁 庞强 唐萍 廖文婷 李存枚 陈秋莉 邓松华 |
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| 作者单位： | 安徽医科大学病理生理学教研室,合肥,230032;第二军医大学微生物学教研室,上海,200433 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，安徽省自然科学基金，安徽省教育厅自然科学重点科研项目 |
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| 摘 要： | 目的 构建免疫球蛋白结合分子金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)和链球菌蛋白G(SPG)单结构域随机组合噬菌体展示文库,为研究其分子功能与结构的关系奠定基础.方法 PCR扩增制备SPA的A、B、C 、D、 E结构域和SPG的B2结构域核苷酸片段,在片段两端通过引物引入XbaⅠ酶切位点和保护碱基,3′端引入3个氨基酸大小的随机连接肽核苷酸序列,各结构域核苷酸片段经XbaⅠ酶消化,在T4连接酶作用下随机相互连接并克隆于噬菌体展示载体pCANTAB5S,克隆产物转化E.coli DH5α,提取原代库质粒转化E.coli TG1,经M13K07辅助噬菌体拯救,构建成SPA和SPG单结构域随机组合噬菌体展示文库.结果 该噬菌体展示文库库容量为1.87×107 cfu,滴度为1.3×1014 TU/ml,文库的片段插入率近100%,其中插入多个结构域的阳性克隆占21.7%,序列分析显示各结构域之间的连接和随机连接肽序列具有随机性.结论 成功地构建了SPA和SPG单结构域随机组合噬菌体展示文库,该文库在库容量、多样性和随机性方面满足体外分子进化研究的要求.
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| 关 键 词： | 噬菌体展示 随机连接肽 SPA SPG |
Constructing a phage-displayed random combinatorial library of SPA and SPG single domains |
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| Huang Desheng,Pan Wei,Cao Jie,et al. Constructing a phage-displayed random combinatorial library of SPA and SPG single domains[J]. Acta Universitis Medicinalis Anhui, 2010, 45(6): 729-733. DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2010.06.001 |
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| Authors: | Huang Desheng Pan Wei Cao Jie et al |
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| Affiliation: | Huang Desheng1,Pan Wei2,Cao Jie2,et al ( 1Dept of Pathophysiology,Anhui Medical University,Hefei 230032,2 Dept of Microbiology,Second Military Medical University,Shanghai 200433) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | SPA SPG |
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