| 真核表达质粒pcDNA3．1（＋）-rmCGβ的构建和鉴定 |
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| 作者姓名： | 许铁峰 汪良 夏立平 陈兴 阎瑾琦 于继云 |
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| 作者单位： | [1]海南医学院肿瘤研究所附属医院肿瘤外科,海口570102 [2]苏州大学附属第一医院普通外科235300,海口570102 [3]军事医学科学院基础医学研究所疫苗工程研究室,北京100850 |
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| 摘 要： | 目的构建恒河猴绒毛膜促性腺激素β亚基macacam ulattac horionicg onadotrophin β subunit，rmCGβ）基因真核表达质粒pcDNA3．1（＋）-rmCGβ，并了解该质粒能否在真核细胞中表达。方法通过PCR扩增rmCGβ的全段基因cDNA，应用基因工程技术将扩增的cDNA克隆至PGM-Teasy，测序后插入pcDNA3．1（＋）真核表达质粒，构建重组真核表达质粒pcDNA3．1（＋）-rmCGβ，经限制内切酶酶切分析及测序鉴定正确后，用脂质体转染技术转染B16细胞，通过RT-PCR扩增出B16／pcDNA3．1（＋）-rmCGβ细胞株中rmCGβ全段基因cDNA。结果经4轮PCR，成功扩增出rmCGβ的cDNA全长基因，酶切和测序证明正确构建了真核表达质粒pcDNA3．1（＋）-rmCGβ，通过RT-PCR方法证实该质粒能在B16真核细胞中正确表达。建立了稳定的细胞株B16／pcDNA3．1（＋）-rmCGβ。结论成功克隆和构建了rmCGβ的真核表达质粒载体pcDNA3．1（＋）-rmCGβ，为进一步研究rmCGβ的新功能和免疫治疗奠定了基础。
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| 关 键 词： | 恒河猴绒毛膜促性腺激素β亚基 质粒 真核表达 肿瘤疫苗 |
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