多单位核酶对慢性粒细胞白血病细胞的增殖抑制及凋亡诱导效应研究

目的：探讨多单位核酶体外净化慢性粒细胞白血病（慢粒）骨髓的可能性,研究多单位核酶的体外切割活性及对慢粒细胞恶性表型的逆转作用。方法：针对慢粒发病中起重要作用的bcrabl融合基因,在融合位点两侧44碱基范围内设计,合成3个核酶,其中2个切割位点位于bcr基因,1个位于abl基因。通过基因重组构建多单位核酶体外转录载体及逆转病毒表达载体,鉴定其体外切割活性。将多单位核酶逆转录病毒表达载体转染K562细胞,应用MTT,3H－TdR掺入,RT－PCR,斑点杂交,流式细胞仪,透射及扫描电镜等方法,检测多单位核酶对慢粒细胞增殖活性及细胞超微结构,细胞周期,凋亡等的影响。结果：多单位核酶的体外切割活性为70．8％,逆转录病毒载体转染慢粒酶转染细胞后能够有效切割细胞RNA,使转染细胞RNA减少1000倍左右,流式细胞仪检测显示多单位核酶转染72h后,18．4％的细胞发生凋亡,大多数细胞被阻滞于G期,分裂期（S期）细胞数减少约41．9％,透射,扫描电镜见转染细胞出现核固缩,凋亡小体等细胞凋亡的特异性表现。结论：多单位核酶不仅具有较高的体外切割活性,而且其逆转录病毒载体能够有效转染慢粒细胞系,在细胞内持续表达,切割细胞RNA,诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,逆转慢粒细胞的恶性表型,在慢粒基因治疗中具有潜在应用的价值。

The effect of multi-unit ribozymes on the growth inhibition and apoptosis induction of CML K562 cells