应用细胞工程和转基因技术治疗糖尿病：“胰岛代理细胞”的构建研究

背景：由于胰岛细胞分离技术难度较大，目前糖尿病细胞移植治疗尚缺乏理想的细胞来源。目的：构建具有生理性胰岛素分泌能力胰岛代理细胞系，为糖尿病基因治疗提供有效手段。设计：随机对照的实验研究。地点、材料和干预：本研究在第三军医大学附属新桥医院中心实验室进行。以携葡萄糖激酶(glucokinase，GK)基因的逆转录病毒及携人胰岛素原基因突变体(mutant proinsulin gene，MPIN)的逆转录病毒共同感染人肝癌细胞系HepG2细胞，G418筛选，放免法、Western—blotting及RT-PCR鉴定；挑选联合表达GK及成熟胰岛素的HepG2细胞进行葡萄糖反应性胰岛素分泌反应的检测，以单独表达成熟胰岛素的HepG2细胞作对照。主要观察指标：不同葡萄糖浓度条件下，联合表达GK及成熟胰岛素的HepG2细胞培养上清中的胰岛素浓度。结果：G418筛选3周获阳性细胞克隆，放免法、Western—blotting挑选出两个目的基因表达均较强的HepG2细胞1株，命名为细胞克隆“β”；RT—PCR证实细胞“β”中已有两个目的基因的转录；在细胞“β”中获得葡萄糖反应性胰岛素分泌，葡萄糖浓度约1．75-2．00mmol／L时出现胰岛素分泌高峰；而在单独表达成熟胰岛素的HepG2细胞中，各种葡萄糖浓度引起的胰岛素分泌差异无显著性意义(P&;gt;0．05)。结论：成功构建了具有生理性胰岛素分泌能力的“胰岛代理细胞”系。