pH对衰老相关β-半乳糖苷酶染色的影响

目的观察正常老化及应激诱导老化（stress—inducedprematuresenescence，SIPS）的小鼠成纤维细胞在不同pH值条件下，衰老相关β-半乳糖苷酶（senescence—associatedp—galactosidase，SA—β-Gal）染色效果的变化规律。方法取新生1～3dC57BL／6小鼠背部皮肤成纤维细胞进行传代培养，UVB照射应激诱导老化细胞，以不同代次的细胞和应激诱导老化细胞为实验对象，进行衰老相关蛋白检测，并在不同pH条件下进行衰老相关β-半乳糖苷酶染色，对其着色情况进行观察和分析。结果在P1代细胞、P6代细胞、应激诱导老化细胞和P12代细胞中，p53／p21蛋白表达依次增多；正常P1代细胞衰老相关β-半乳糖苷酶染色阴性，其余细胞组随着pH值的由低到高（6．0～8．0），着色情况均呈现由强到弱的变化趋势，P6细胞、SIPS细胞、P12细胞分别在pH7．0、7．5和8．0时阳性染色消失。结论随着细胞衰老程度的增加，衰老相关p一半乳糖苷酶染色将在较高pH时才会呈现假阴性，提示染色时安全pH范围应根据细胞代次而定。