沉默Bmi-1表达对人小细胞肺癌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的探讨沉默原癌基因Bmi-1(B-cell-specific moloney murine leukemia virus integration site 1)对人小细胞肺癌NCI-H345细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法将NCI-H345细胞分为对照组(不做处理)、Bim-1 NC组(转染转染Bmi-1基因阴性对照序列)和Bmi-1转染组(转染转染Bmi-1基因序列)3组,以脂质体转染法转染上述各组细胞,采用荧光定量(RT-PCR)检测Bmi-1 mRNA的相对表达水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测Bmi-1和Cleaved Caspase-3蛋白的相对表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。结果转染Bmi-1 48 h后,与对照组相比,Bmi-1转染组NCI-H345细胞中Bmi-1 mRNA和蛋白的相对表达水平均明显降低(P0.05);Bim-1 NC组和对照组相比,Bim-1 mRNA和蛋白表达水平差异无统计学意义(P0.05)。流式细胞仪检测结果显示,与对照组相比,Bmi-1 NC组细胞中G0/G1期、S期和G2/M期细胞所占比例差异无统计学意义(P0.05),Bmi-1转染组中G0/G1期细胞所占比例明显升高,S期和G2/M细胞所占比例明显下降,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,Bmi-1 NC组的细胞凋亡率差异不显著(P0.05),Bmi-1转染组的细胞凋亡率显著升高(P0.05)。Western blot检测结果显示,Bmi-1转染组细胞中Cleaved Caspase-3蛋白的表达水平较对照组明显升高(P0.05),Bmi-1 NC组细胞中Cleaved Caspase-3蛋白的表达水平与对照组间差异不显著(P0.05)。结论 Bmi-1基因沉默能诱导NCI-H345细胞凋亡,其作用机制可能与阻滞G0/G1期和上调Cleaved Caspase-3蛋白的表达有关。