| 小鼠PPARδ腺病毒载体的构建及其在INS-1细胞中的表达 |
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| 作者姓名： | 姜友昭 张玲 周艳 陈兵 |
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| 作者单位： | 第三军医大学西南医院内分泌科,重庆,400038;第三军医大学西南医院门诊部,重庆,400038;第三军医大学西南医院乳腺中心,重庆,400038 |
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| 摘 要： | 目的 构建含有小鼠过氧化物酶增殖激活受体δ(peroxisome proliferate activated receptor delta,PPARδ)基因的重组腺病毒表达载体.方法 通过Kpn Ⅰ和EcoRⅤ双酶切,从pCDNA3.0-mPPARδ载体中得到含有小鼠PPARδ全长编码序列的片段,将mPPARδ与pAdtrack-CMV相连接并用Pme Ⅰ线性化后,转化含有pAdeasy骨架质粒的细菌BJ5183,在细菌内同源重组后得到pAd-mPPARδ质粒.pAd-mPPARδ经Pac Ⅰ线性化后用LipofectamineTM 2000转染HEK293细胞,包装得到含PPARδ基因的病毒重组子,将病毒重组子在HEK293细胞中扩增后,反复冻融得到滴度较高的含PPARδ的病毒液.将收集的病毒液感染INS-1细胞,绿色荧光观察GFP和Western blot检测PPARδ蛋白的表达.结果 成功构建了含有小鼠PPARδ基因的重组腺病毒载体,病毒滴度为1.5×1010 pfu/ml.重组腺病毒感染后可使INS-1细胞PPARδ蛋白表达明显增加.结论 该重组腺病毒载体的构建为研究PPARδ基因在胰岛细胞中生物学功能提供了一定的工作基础.
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| 关 键 词： | 腺病毒载体 PPARδ INS-1细胞 |
| 文章编号： | 1000-5404（2007）01-0068-03 |
| 修稿时间： | 2006-08-05 |
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