细菌—酵母穿梭表达质粒pGBKT7—MIF的构建及转化

目的：构建并转化能在酵母菌AH109中表达巨噬细胞游走抑制因子（MIF）的穿梭表达质粒pGBKT7-MIF。方法：用RT-PCR方法从人T淋巴细胞中扩增MIF基因全外显子片段，并定向克隆人细菌-酵穿梭表达质粒pGBKT7中；用PEG/LiAC法将pGBKT7-MIF转化感受态酵母菌AH109。提取转化酵母菌的质粒DNA，转化大肠杆菌并行质粒的酶切鉴定。结果：扩增出人MIFcDNA片段，限制性内切酶酶切和DNA测序证实获得正确有重组质粒pGBKT7-MIF；获得可在色氮酸缺陷培养基（SD/-trp）上生长含pGBKT7-MIF的酵母菌克隆。酶切鉴定表明pGBKT7-MIF已转化入酵母菌AH109。结论：成功构建穿梭质粒pGBKT7-MIF，并转化入酵母菌AH109。