| DREAM短发卡质粒载体的构建及在C6细胞中沉默DREAM基因的效应 |
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| 引用本文： | 程智刚,莫秋华,李靖怡,王云姣,白念岳,贺正华,胡浩,杨胜辉,鄢建勤,郭曲练.DREAM短发卡质粒载体的构建及在C6细胞中沉默DREAM基因的效应[J].中国现代医学杂志,2011,21(10). |
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| 作者姓名： | 程智刚 莫秋华 李靖怡 王云姣 白念岳 贺正华 胡浩 杨胜辉 鄢建勤 郭曲练 |
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| 作者单位： | 中南大学湘雅医院,麻醉与重症医学教研室,湖南,长沙,410008 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(No:30872427); 湖南省自然科学基金资助项目(No:05JJ40136); 中南大学2009年硕士研究生创新课题资助 |
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| 摘 要： | 目的 构建表达下游调控元件的拮抗分子(DREAM)基因序列特异性的短发卡RNA(shRNA)质粒载体,检测其对C6细胞DREAM基因的干扰作用,为研究DREAM基因功能提供有力工具.方法 为了构建pRNAT-U6.1/Neo载体介导DREAM shRNA表达的质粒,针对DREAM的19碱基大小的片段,分别设计3对寡核苷酸和1条非特异性阴性对照序列,形成双链后将其依次连入带有U6启动子的pRNAT-U6.1/Neo载体(命名为pRNAT-DREAM),两对DNA双链连接后形成中间由9个碱基序列间隔的反向互补序列,构建成能产生DREAM shRNA的质粒.用构建成功的4条质粒转染C6细胞,分别采用Realtime PCR和蛋白印迹检测其DREAM基因的mRNA和蛋白表达.结果 酶切、连接后构建成的质粒,经酶切与测序证实构建成功,无任何碱基突变.在培养的神经胶质细胞中转染率为85%左右,pRNAT-DREAM-Ⅱ和pRNAT-DREAM-Ⅲ显著抑制DREAM基因的表达.结论 成功构建了能表达DREAM shRNA的质粒载体pRNAT-DREAM-Ⅱ、pRNAT-DREAM-Ⅲ,此项研究结果 为DREAM信号通路的深入研究奠定了基础.
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| 关 键 词： | RNA干扰 下游调控元件拮抗分子 质粒 栽体 |
pRNAT-U6.1/Neo-mediated plasmid expressing DREAM shRNA and silencing DREAM in C6 cell lines |
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| CHENG Zhi-gang
,
MO Qiu-hua
,
LI Jing-yi
,
WANG Yun-jiao
,
BAI Lian-yue
,
HE Zhen-hua
,
HU Hao
,
YANG Shen-hui
,
YAN Jian-qing
,
GUO Qu-lian.pRNAT-U6.1/Neo-mediated plasmid expressing DREAM shRNA and silencing DREAM in C6 cell lines[J].China Journal of Modern Medicine,2011,21(10). |
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| Authors: | CHENG Zhi-gang MO Qiu-hua LI Jing-yi WANG Yun-jiao BAI Lian-yue HE Zhen-hua HU Hao YANG Shen-hui YAN Jian-qing GUO Qu-lian |
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| Institution: | CHENG Zhi-gang,MO Qiu-hua,LI Jing-yi,WANG Yun-jiao,BAI Lian-yue,HE Zhen-hua,HU Hao,YANG Shen-hui,YAN Jian-qing,GUO Qu-lian(Department of Anesthesiology and Critical Care Medicine,Xiangya Hospital,Central South University,Changsha,Hunan 410008,P.R.China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | RNA interference DREAM plasmid vector |
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