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| 采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源抗肾癌抗体基因库 | |
| 引用本文： | 陈振瑞,李长征,贺微,周烨,张哲欢,刘淑文,谭万龙,周辰.采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源抗肾癌抗体基因库[J].南方医科大学学报,2010,30(5). |
| 作者姓名： | 陈振瑞 李长征 贺微 周烨 张哲欢 刘淑文 谭万龙 周辰 |
| 作者单位： | 1. 南方医科大学南方医院泌尿外科,广东广州,510515 2. 南方医科大学基因工程研究所,广东广州,510515 3. 南方医科大学药学院抗病毒中心,广东广州,510515 4. 香港Dgen生物技术有限公司,香港,999077 |
| 基金项目： | 香港Dgen Biotech Ltd科研基金 |
| 摘 要： | 目的 采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源抗肾癌抗体基因库.方法 分离肾癌患者的外周血淋巴细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,采用RT-PCR的方法 扩增抗体全长Kappa型轻链(LCκ)和重链可变区(VH)基因,分别插入载体pDGB-HC-TM,电击转化感受态大肠杆菌TOP010,构建轻、重链抗体基因库,然后将轻、重链抗体基因库联合转染293T细胞,流式细胞仪分析全长人源抗体在293T细胞表面的表达.结果 成功构建IgG1-Kappa型抗肾癌抗体基因库,随机挑选的克隆经DNA序列分析显示轻、重链库的序列正确性达90%(9/10)和80%(8/10),流式细胞仪分析显示来自轻、重链库的上述克隆各有7个可检测到相应基因在293T细胞表面的表达,可表达抗体库库容量高达7.5×1010.结论 IgG1-Kappa型抗肾癌抗体基因库转染293T细胞后能够在细胞表面表达全长人源抗体,抗体的多样性为下一步筛选特异性抗体奠定良好的基础. |
| 关 键 词： | 哺乳动物细胞表面展示 肾癌 抗体基因库 全长人源抗体 流式细胞仪 |
Construction of human full-length renal cell carcinoma patient-specific antibody library by mammalian cell surface display |
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| CHEN Zhen-rui,LI Chang-zheng,HE Wei,ZHOU Ye,ZHANG Zhe-huan,LIU Shu-wen,TAN Wan-long,ZHOU Chen.Construction of human full-length renal cell carcinoma patient-specific antibody library by mammalian cell surface display[J].Journal of Southern Medical University,2010,30(5). | |
| Authors: | CHEN Zhen-rui LI Chang-zheng HE Wei ZHOU Ye ZHANG Zhe-huan LIU Shu-wen TAN Wan-long ZHOU Chen |
| Abstract: | |
| Keywords: | |
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