| 重组人白介素1受体Ⅰ型细胞外基因在毕赤酵母的表达 |
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| 引用本文： | 吕渭辉,庄俊华,陈炜烨,张战锋,黄宪章. 重组人白介素1受体Ⅰ型细胞外基因在毕赤酵母的表达[J]. 南方医科大学学报, 2010, 30(8) |
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| 作者姓名： | 吕渭辉 庄俊华 陈炜烨 张战锋 黄宪章 |
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| 作者单位： | 1. 广州中医药大学DME中心,广东,广州,510405
2. 广州中医药大学第二临床医学院,广东,广州,510120 |
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| 摘 要： | 目的 构建白介素1受体Ⅰ型细胞外基因(可溶性白介素1受体Ⅰ型,sIL-1R Ⅰ)的pPICZαA-sIL-1R Ⅰ重组表达载体,利用毕赤酵母表达技术表达sIL-IR Ⅰ蛋向.方法 采用RT-PCR技术扩增基因sIL-1R Ⅰ.经酶切连接构建重组质粒pPICZαA-sIL-IR Ⅰ,转化E.coli Stb13;阳性克隆经测序成功后,把pPICZαA-sIL-IR Ⅰ重组质粒电转入毕赤酵母菌株GS115,PCR对阳性克隆进行鉴定,以及对GS115转化子表型筛选.确定表型后,对重组菌株进行甲醇诱导蛋白表达.提取菌体蛋白和上清液进行Western blotting检测以鉴定蛋白表达属于菌内表达还是分泌表达.结果 pPICZαA-sIL-IR Ⅰ重组质粒构建成功;pPICZαA-sIL-IR Ⅰ成功电转入酵母菌GS115:转化子表型筛选结果为甲醇诱导缓慢型Muts:对培养上清和菌体蛋白进行Western blotting检测结果:上清没有检测到蛋白,在菌体内检测到蛋白.结论 成功运用毕赤酵母表达体系表达sIL-1R Ⅰ蛋白,为sIL-IR Ⅰ的研究和应用提供实验基础.
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| 关 键 词： | 白介素1受体Ⅰ型 重组质粒 毕赤酵母 |
Expression of recombinant extracellular region of human interleukin-1 receptor type I in Pichia pastoris |
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| L Wei-hui,ZHUANG Jun-hua,CHEN Wei-ye,ZHANG Zhan-feng,HUANG Xian-zhang. Expression of recombinant extracellular region of human interleukin-1 receptor type I in Pichia pastoris[J]. Journal of Southern Medical University, 2010, 30(8) |
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| Authors: | L Wei-hui ZHUANG Jun-hua CHEN Wei-ye ZHANG Zhan-feng HUANG Xian-zhang |
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| Affiliation: | L(U) Wei-hui,ZHUANG Jun-hua,CHEN Wei-ye,ZHANG Zhan-feng,HUANG Xian-zhang |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | interleukin-1 receptor type 1 recombinant plasmid Pichia pastoris |
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