| 重组人PD-L1在大肠杆菌BL-21中的表达、纯化和鉴定 |
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| 引用本文： | 陈娇,张金鸽,王辉,计宝辉,孔祥丽,张平.重组人PD-L1在大肠杆菌BL-21中的表达、纯化和鉴定[J].华西药学杂志,2009,24(5). |
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| 作者姓名： | 陈娇 张金鸽 王辉 计宝辉 孔祥丽 张平 |
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| 作者单位： | 口腔疾病研究国家重点实验室·四川大学,四川成都,610041 |
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| 摘 要： | 目的 分离纯化人程序死亡蛋白-1(PD-LI)基因,制备重组人PD-L1蛋白,为进一步研究PD-L1在肿瘤免疫逃逸中的作用和机制建立基础.方法 通过RT-PCR分离纯化人PD-L1基因,并将其克隆到原核表达质粒pGEX-4T一1中,经酶切,测序鉴定分析后,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达.产物经GST蛋白纯化系统进行纯化后,用10%SDS-PAGE及Western Blot分析鉴定.结果 经RT-PCR分离纯化的PD-L1 cDNA分子由645 bp构成,编码相对分子量约25 KD的蛋白,并与GST形成融合蛋白.GST-PD-L1融合蛋白相对分子量约46 KD.Western Blot结果显示,该蛋白能被兔抗GST和抗PD-L1抗体识别.结论 成功构建了PD-L1原核表达载体,并在大肠杆菌BL21中获得高效表达.
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| 关 键 词： | 程序死亡蛋白-1 原核表达 纯化和鉴定 大肠杆菌BL-21 |
Expression and identification of rhPD-L1 in E.coli BL-21 (DE3) |
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