| 人肠三叶因子酵母双杂交诱饵载体的构建及其自激活作用鉴定 |
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| 引用本文： | 王林,孙勇,王臻,张勇,吴炜,吕尚军,彭曦. 人肠三叶因子酵母双杂交诱饵载体的构建及其自激活作用鉴定[J]. 解放军医学杂志, 2009, 34(8) |
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| 作者姓名： | 王林 孙勇 王臻 张勇 吴炜 吕尚军 彭曦 |
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| 作者单位： | 第三军医大学西南医院烧伤研究所,创伤、烧伤及复合伤国家重点实验室,重庆,400038 |
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| 摘 要： | 目的 构建人肠三叶因子酵母双杂交诱饵载体并验证其自激活作用.方法 以pET32a-hITF质粒为模板,PCR扩增hITF成熟肽cDNA片段,Sal I和EcpRV双酶切后连接到pENTR3c载体,通过λ噬菌体臂同源重组反应(LR重组反应)将hITF片段连接到酵母双杂交诱饵载体pDEST32,获得诱饵质粒pDEST32-hITF,测序后与酵母双杂交空质粒pDEST22共转化到酵母菌株Mav203,经营养缺陷培养基筛选后,观察在含不同浓度3-氨基三唑(3AT)的营养缺陷培养基中pDEST32-HITF的自激活作用.结果 成功克隆hITF基因片段,构建酵母双杂交诱饵质粒pDEST32-hITF,其与酵母双杂交空载体pDEST22共转化到酵母菌株Mav203后,可在3AT浓度为0、10、25mmol/L的营养缺陷培养基上生长,而在3AT浓度为50、75、100mmol/L的营养缺陷培养基上不能生长.结论 成功构建酵母双杂交诱饵载体,经验证50mmol/L及以上浓度的3AT营养缺陷培养基可以抑制其自激活作用.
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| 关 键 词： | 肠三叶因子 双杂交系统技术 自激活作用 |
Construction of human intestinal trefoil factor yeast two-hybrid vector and characteriztation of its self-activation in yeast cells |
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| WANG Lin,SUN Yong,WANG Zhen,ZHANG Yong,WU Wei,LV Shang-jun,PENG Xi. Construction of human intestinal trefoil factor yeast two-hybrid vector and characteriztation of its self-activation in yeast cells[J]. Medical Journal of Chinese People's Liberation Army, 2009, 34(8) |
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| Authors: | WANG Lin SUN Yong WANG Zhen ZHANG Yong WU Wei LV Shang-jun PENG Xi |
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